Усовершенствование системы лабораторной диагностики Блютанга

• Автор: Вялых, Иван Владимирович
• Шифр специальности: 06.02.02
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2011
• Место защиты: Покров
• Количество страниц: 166 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ
УСЛОВНЫЕ СОКРАЩЕНИЯ
1 ВВЕДЕНИЕ
1.1 Актуальность темы
1.2 Степень разработанности проблемы
1.3 Цель и задачи исследования
1.4 Научная новизна результатов исследования
1.5 Практическая значимость работы
1.6 Апробация работы
1.7 Публикации
1.8 Соответствие диссертации паспорту научной специальности
1.9 Структура диссертации
1.10 Основные положения диссертации, выносимые на защиту
1.11 Личный вклад автора в выполнение работы
2 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
2.1 КРАТКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА БЛЮТАНГА
2.1.1 Историческая справка
2.1.2 Экономическое значение
2.1.3 Географическое распространение
2.1.4 Эпизоотологические особенности
2.1.5. Патогенез блютанга
2.1.6 Клинические признаки и патологоанатомические изменения..
2.2 КРАТКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ БЛЮТАНГА
2.2.1 Таксономическое положение вируса блютанга
2.2.2 Структура вируса

2.2.3 Антигенная вариабельность и родство вируса блютанга с другими представителями рода Orbivirus
2.2.4 Устойчивость вируса к физико-химическим факторам
2.3 ЛАБОРАТОРНАЯ ДИАГНОСТИКА БЛЮТАНГА
2.3.1 Выделение вируса
2.3.2 Идентификация вируса
2.3.3 Типирование вируса блютанга
2.3.4 Выявление специфических антител к вирусу блютанга
2.3.5 Молекулярно-биологические методы - выявление РНК вируса блютанга
2.3.6 Статистические диагностические показатели методов
2.5 ЗАКЛЮЧЕНИЕ ПО ОБЗОРУ ЛИТЕРАТУРЫ
3 СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
3.1 МАТЕРИАЛЫ
3.1.1 Вирусы
3.1.2 Сыворотки
3.1.3 Животные
3.1.4 Культуры клеток
3.1.5 Питательные среды, сыворотки и растворы
3.1.6 Реактивы и препараты
3.1.7 Диагностические препараты, наборы, тест-системы
3.1.8 Оборудование и расходные материалы
3.2 МЕТОДЫ
3.2.1 Воспроизведение блютанга на восприимчивых животных
3.2.2 Отбор проб крови
3.2.3 Получение сыворотки
3.2.4 Отбор проб органов
3.2.5 Подсчет количества лейкоцитов в крови
3.2.6 Определение инфекционной активности вируса в культуре клеток
3.2.7 Определение инфекционной активности вируса на куриных эмбрионах
3.2.8 Определение вируснейтрализующих антител к вирусу блютанга
3.2.9 Определение специфических антител к вирусу блютанга реакцией длительного связывания комплемента (РДСК)
3.2.10 Определение специфических анти-УР7 антител к вирусу блютанга конкурентным ТФ ИФА
3.2.11 Выделение вируса блютанга
3.2.12 Идентификация изолята вируса реакцией прямой иммунофлюоресценции (РПИФ)
3.2.13 Типирование выделенного вируса блютанга реакцией нейтрализации (PH) с типоспецифическими сыворотками
3.2.14 Определение стерильности
3.2.15 Статистические методы анализа результатов
3.3 РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ
3.3.1 Сравнительная оценка эффективности методов выделения вируса блютанга
3.3.2 Выделение вируса блютанга от импортированного в Россию крупного рогатого скота и полученных от них телят
3.3.3 Характеристика изолятов вируса блютанга

- определение серотипа циркулирующих штаммов;
- обследование животных при осуществлении международной торговли.
Серологическая'диагностика блютанга важна при исследовании в очагах
болезни и для выявления возможных носителей вируса в районах, где заболевание у восприимчивых животных клинически не выражено- [188]. Проведение серологического мониторинга необходимо в целях обеспечения продовольственной безопасности и осуществления международной торговли.
Каждый из .10 сегментов генома БТВ кодирует отдельный вирусный белок, к каждому из которых в организме животных вырабатываются антитела: VP2 и VP5 ответственны за выработку типоспецифических вируснейтрализующих антител, a VP7 — группоспецифических антител. Антитела к другим структурным и неструктурным белкам вируса также играют определенную роль [203].
МЭБ [165] для исследований при осуществлении международной торговли предписаны два группоспецифических метода: РДП [186] и конкурентный ТФ ИФА [199]. Другие методы, используемые для выявления группоспецифических антител, включают РСК [224], непрямой или блокирующий ТФ ИФА [33, 148], РНИФ [225] и иммуноблоттинг [82]. Из типоспецифических реакций рекомендуется PH [122, 161], а РТГА, несмотря на ряд успешных примеров её использования [17, 132, 204, 255], не рекомендована [255].
Иммунодиффузия
РДП для БТВ была впервые описана Klontz G. W. et al. в 1962 г. [151]. Некоторое время возникали проблемы с получением антигена для данной реакции, затем Wang С. S. et al. [261] описали метод получения растворимого культурального антигена БТВ. Хотя РДП может все еще использоваться в некоторых лабораториях, но она является низкочувствительной [80; 115], дает перекрестные реакции с другими вирусами рода Orbivirus [80].
Антитела к вирусу блютанга РДП можно выявить на 10-24 сутки после заражения у овец [84, 197] и на 21-28 сутки у крупного рогатого скота [197].