Получение антигенов Mycobacterium tuberculosis и выявление наиболее значимых из них для диагностики туберкулеза

• Автор: Алфредо Элдер
• Шифр специальности: 03.02.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2013
• Место защиты: Казань
• Количество страниц: 98 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ
УСЛОВНЫЕ ОБОЗНАЧЕНИЯ И СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
ВВЕДЕНИЕ
1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1. Общая характеристика микобактерий
1.1.1. Mycobacterium tuberculosis — возбудитель туберкулеза человека
1.1.2. Особенности строения Mycobacterium tuberculosis
1.2. Туберкулез человек
1.2.2. Роль Т-лимфоцитов в формирования иммунной защиты от Mycobacterium tuberculosis
1.2.3. Гуморальнный иммунный ответ при туберкулезе Mycobacterium tuberculosis
1.3.Диагностикая туберкулеза
1.3.1.Бактериоскопия и бактериогический метод диагностики Mycobacterium tuberculosis
1.3.2. Метод полимеразной цепной реакции
1.3.3. Иммунодиагностика
1.4.Антигены Mycobacterium tuberculosis
1.5.3аключение по обзору литературы
2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Штаммы бактерий и биологические препараты
2.2. Питательные среды для культивирования Mycobacterium
tuberculosis
2.3. Основное оборудование
2.4. Основные реактивы
2.5. Условия проведения анализов
2.5.1. Условия проведения иммуноферментного анализа
2.5.2. Условия проведения электрофореза
2.5.3. Условия проведения иммублотинга
2.5.4. Гель фильтрация на сефадексе G-200

3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
3 Л. Выявление секретируемых антигенов Mycobacterium tuberculosis
3.2. Выделение антигенных комплексов из фильтрата культурального супернатанта Mycobacterium tuberculosis с помощью этонола
3.3. Выделение антигенных комплексов Mycobacterium tuberculosis фильтрата культурального супернатанта методом
ультрацентрифугирования
3.4. Спектр белков различных видов микобактерий
3.5. Получение антигена с молекулярной массой 45 кДа из клеток Mycobacterium tuberculosis
4. ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ ИСТОЧНИКОВ ЛИТЕРАТУРЫ

УСЛОВНЫЕ ОБОЗНАЧЕНИЯ И СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ АГ антиген
АТ антитело
БКБ бикарбонат-карбонатный буфер
БСА Бычий сывороточный альбумин
БЦЖ вакцина против туберкулеза (ВСвО
ВИЧ вирус иммунодефицита человека
ГЗТ гиперчувствительность замедленного типа
ГКГС главный комплекс гистосовместимости
ГМ-КСФ гранулоцитарно-макрофагальный колониестимулирующий фактор
ДАТ 2,3-диацилтрегалоза
ДК дендритные клетки
ДСН додецилсульфат натрия
ДМСО диметилсульфоксид (СН3)
ИЛ интерлейкин
ИФА иммуноферментный анализ
ИХА иммунохроматографический анализ
кДа молекулярная масса в килодальтонах
Мф макрофаг
НЦМ нитроцеллюлозная мембрана
ОП оптическая плотность
ПАГ полиакриламидный гель
1111Д очищенная белковая фракциея (туберкулин)
ПТАТ противотуберкулезные антитела
ПЦР полимеразная цепная реакция
РАГА реакции агрегатагглютинации
РГЧЗТ реакция гиперчувствительиости
РИА радиоиммунный анализ
РИП раствор для разведения исследуемых проб
РПГА реакция пассивной гемагглютинации

подхода превосходили по специфичности реакцию Манту, причём ELISpot оказался более чувствительным, чем ELISA [Lalvani et al., 2001].
Таким образом, использование серологических методов диагностики, в частности ИФА, позволяет значительно сократить время лабораторного подтверждения клинического диагноза, активно применять его для диагностики внелегочных форм туберкулеза, и особенно, как отмечают многие авторы, для диагностики туберкулеза у детей .
1.3. Антигены Mycobacterium tuberculosis
Полный антиген туберкулезных микобактерий представляет собой сложный ЛПС комплекс, который при парентеральном введении в вакцинированном организме вызывает образование антител. Полный антиген является полноценным иммуногеном и способствует образованию широкого спектра АТ; фосфолипидный, белковый, полисахаридный компоненты микобактерий не обладают свойствами полного антигена [Колычев Н.М., Госманов Р.Г., 2003]. Авторы описали 4 основные группы растворимых антигенов микобактерий: I группа - антигены, общие для всех видов микобактерий и близких бактериальных родов; II группа - антигены, характерные для медленно растущих микобактерий; III группа - антигены, свойственные быстро растущим микобактериям и нокардиям; IV группа — антигены, специфические для отдельных видов микобактерий. Групповые антигены (А, В, С, Д ) определяют родство видов, входящих в одну группу. У быстрорастущих микобактерий выявлены антигены, отличающие их от медленнорастущих группа А, которая в свою очередь разделена на 3 подгруппы - Al, А2, A3. Микобактерии каждой подгруппы отличаются по 1-2 антигенам, от представителей других групп и подгрупп. Существенные различия в антигеном спектре зарегистрированы среди быстрорастущих микобактерий , которые в связи с этим подразделяются на 3 серогруппы (В, С, Д) [Воробьев с соавт., 2003]. По физико-химическим свойствам групповые