Сравнительное изучение действия канцерогенов на функции клеток, экспрессирующих и не экспрессирующих рецепторы ксенобиотиков

• Автор: Волков, Максим Сергеевич
• Шифр специальности: 14.01.12
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2012
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 102 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ:
I. ВВЕДЕНИЕ
И. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1. Механизмы химического канцерогенеза
2. Общая характеристика химических канцерогенов окружающей среды
3. Химические канцерогены
3.1 Полициклические ароматические углеводороды (ПАУ)
4. Механизм активации непрямых канцерогенов
4.1 Роль цитохрома Р450
4.2 Роль АЬ-рецептора в регуляции метаболизма ксенобиотиков
5. Промоция канцерогенеза
5.1 Лиганды АЬ-рецептора
5.2 Пролиферация
5.3 Структура и функция АР
5.4 Структура и функция ОТ-кВ
5.5 Межклеточные щелевые коммуникации (МЩК) и
их ингибирование в ходе опухолевой промоции
5.6 Апоптоз
6. Эффекты канцерогенов не связанные с АЬ-рецептором
III. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
1. Культуры клеток
2. Используемые в работе вещества
3. Методика исследования клеточного цикла
4. Выделение РНК из культивируемых клеток
5. Обратная транскрипция и ПЦР
6. Определение пролиферации
7. Трансфекция репликативной конструкции ХБ-кВ
и определение активности репортерного гена
8. Трансфекция гена АР-1 и определение активности репортерного гена
9. Трансфекция siRNA
10. Электрофорез и иммуноблотинг
11. Проницаемость щелевых контактов
IV. РЕЗУЛЬТАТЫ
1. Гепатома
1.1 Определение пролиферации и исследование
клеточного цикла
1.2 Определение активности АР
1.3 Определение активности NF-кВ и экспрессия IkB
2. Гепатома HepG2
2.1 Определение пролиферации и исследование
клеточного цикла
2.2 Определение активности АР
2.3 Определение активности NF-кВ и экспрессия IkB
2.4 Определение пролиферации клеток HepG2 в условиях ингибирования экспрессии Ah рецептора и ARNT
3. Клетки HelA и трансформированные фибробласты (CL-1)
3.1 Определение пролиферации
3.2 Определение активности NF-kB
3.3 Эффект ПАУ на межклеточные щелевые контакты (МЩК)
V. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
VI. ВЫВОДЫ
VII. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

Список сокращений:
ТТАУ - полицикличечкие ароматические углеводороды
БП - бензо/а/пирен
Б(е)П - бензо/е/пирен
MX - 3-метилхолантрен
а-НФ - а нафтофлавон
Р-НФ - р нафтофлавон
ДМБА - 7 ,12 - диметилбензантрацен
IKB - ингибиторная субъединица NF-kB, экспрессируемая при активации NF-kB
IKK - киназа, фосфорилирующая IkB мщк - межклеточные щелевые контакты
АР-1 - activated protein 1.Транскрипционный фактор, являющийся димером, содержащим по одному онкобелку от представителей семейства Jun и Fos. NF-kB- ядерный транскрипционный фактор кВ ТРА - 12-о-тетрад еканоилфорбол- 13-ацетат
Ah-рецептор - Aryl hydrocarbon receptor. Рецептор, являющийся сенсором попадания в клетку молекул ксенобиотиков.
ARNT - Aryl hydrocarbon receptor nuclear translocator. Белок, образующий комплекс с Ah-рецептором и обеспечивающий его прохождение в ядро клетки.
ТХДЦ - 2,3,7,8 - тетрахлордиоксидибенздиоксин GPDH - глицерол-3-фосфат дегидрогеназа

Таким образом, ингибирование МЩК зависит от структуры используемого ПАУ и от типа клеток.
Повреждения межклеточных щелевых контактов являются важным этиологическим фактором в формировании опухоли. Следует подчеркнуть, что очевидно существование нескольких механизмов, в основном эпигенетических, ответственны за нарушения межклеточных щелевых контактов при развитии опухоли.
5.6 Апоптоз
Ингибирование апоптоза является третьим необходимым фактором в реализации опухолевой промоции. Наиболее широко используемой моделью по изучению этого феномена является так называемый байстандер (bystander англ.) эффект. Суть его заключается в передаче апоптотического сигнала от клеток с запущенным апоптозом соседним нормальным клеткам связь которых осуществляется через МЩК, сформированных из различных типов коннексинов. Sanson показал, что трансфекция в клетки С6 (показывают слабый байстандер эффект и имеют низкий уровень коннексинов) гена коннексина 43 вызывала индукцию стойкого байстандер эффекта. Игибирование щелевых контактов отменяло метаболическое взаимодействие между клетками (93). Tanaka проводили опыты по трансфекции гена коннексина 32 в клетки HeLa с отсутствием МЩК. Оказалось, что байстандер эффект возрастает в результате экспрессии коннексина 32 (106).
Некоторые исследователи предполагают, что молекулой передающей апоптотический сигнал через МЩК являются ионы кальция.
Имеются данные, свидетельствующие, что некоторые опухолевые промоторы способны ингибировать байстандер эффект. В клетках Сертоли мыши ди-(2этилгексил) фталат вызывал значительную дисактивацию МЩК наряду с ингибированием таких апоптотических изменений, вызваннх отсутствием сыворотки как, конденсация хроматина,