Разработка методов и средств обеспечения микробиологической безопасности объектов ветеринарного надзора

• Автор: Артемов, Артем Валерьевич
• Шифр специальности: 06.02.05, 06.02.02
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2012
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 134 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ
ВВЕДЕНИЕ
1. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР
1.1. Аспекты обеспечения безопасности объектов ветеринарного

надзора
1.2. Контроль безопасности на основе методов ДНК- и иммунодиагностики
2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Материалы исследований
2.2. Методы исследований
2.2.1. Методы бактериологического анализа сырья, мясной продукции и помещений хладокомбината
2.2.2. Методика определения бактерицидной и бактериостатической активности препаратов кластерного серебра
2.2.3. Методика определения дезинфицирующей активности препаратов кластерного серебра
2.2.4. Методика определения бактерий на основе иммунохроматографии
2.2.5. Методика определения возбудителей инфекций на основе ПЦР
и биочипов
2.2.6. Получение ДНК-зондов с помощью ПЦР
2.2.7. Амплификация ДНК методом рассеянной затравки с гексануклеотидными праймерами
2.2.8. ДНК-гибридизация на биочипах
2.2.9. Статистическая обработка результатов
2.3. Результаты исследований
2.3.1. Изучение биоцидных свойств препаратов кластерного серебра «Серебряный щит»
2.3.2. Разработка тест-системы индикации сальмонелл

различных серогрупп на основе ИИХЭ с наночастицами коллоидного
золота
2.3.3. Разработка методики и тест-системы индикации вобудителей бактериальных инфекций на основе ПЦР и биочипов
3. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
4. ВЫВОДЫ
5. ПРЕДЛОЖЕНИЯ ДЛЯ ПРАКТИКИ
6. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
7. ПРИЛОЖЕНИЕ

ВВЕДЕНИЕ
Актуальность темы
Среди различных аспектов обеспечения безопасности объектов ветеринарного надзора значительная роль принадлежит контролю
микробных контаминаций и биоцидной обработке этих объектов.

Разработка и совершенствование методов и средств указанных элементов безопасности связаны с достижениями различных сопряженных наук, в том числе с молекулярной биологией, иммунологией, нанотехнологией и ее разделом бионанотехнологией.
В современном представлении нанотехнология - это наука и технология коллоидных систем, коллоидная химия, коллоидная физика, молекулярная биология, микроэлектроника. Функционирование систем нанотехнологии отличается от функционирования истинных растворов и расплавов и от объектов макромира благодаря высокоразвитой поверхности. Такие эффекты начинают проявляться, когда размер частиц лежит в диапазоне 1-100 нанометров.
Бионанотехнология является разделом нанотехнологии, который занимается изучением и воздействием объектов нанодиапазона на биологические организмы или их использованием для развития наномедицины (в том числе и ветеринарной наномедицины), в частности, созданием препаратов и диагностических систем на основе наночастиц (иммунохроматографических тестов, дот-анализов, световых и электронномикроскопических исследований). Методы исследования бионанотехнологии связаны с манипулированием отдельными атомами и молекулами (ДНК, белков). Таким образом, такие методы, как ПЦР-анализ, анализ нуклеотидных последовательностей нуклеиновых кислот, ДНК-иммуномикрочиповая технология, метод иммунохроматографии с использованием наночастиц коллоидного золота можно отнести к современному направлению в науке - бионанотехнологии.

системы ПЦР определяли на лизатах культур с известным титром (152). Использовались штаммы Y. pseudotuberculosis 995, Y. pseudotuberculosis 15-88, Y. pseudotuberculosis 297, Y. pseudotuberculosis 244. При этом чувствительность реакции для этих штаммов, клетки которых имели

плазмиду р Cad, составляла 10 лизированных клеток в пробе. Чувствительность для тест-систем с праймерами invl, Inv2 была 102 клеток в пробе.
С помощью полимеразной цепной реакции оценивалась динамика перехода Yersinia pseudotuberculosis в покоящееся (некультивируемое) состояние в стерильной почвенной вытяжке и в почвенной вытяжке, содержащей водоросли Scenedesmus или их экзометаболиты (36).
Таким образом, методы ДНК-диагностики являются весьма чувствительными и специфичными методами в исследованиях по индикации и идентификации бактерий и иерсиний в частности. При этом весьма актуальными остаются вопросы разработки более усовершенствованных модификаций, вопросы адаптации методик к конкретным объектам ветеринарно-санитарного контроля при проведении мониторинговых исследований, вопросы разработки методик ускоренной дифференциации патогенных штаммов.
Стандартный ПЦР-метод не дает количественной информации, поэтому невозможно теоретически рассчитать ожидаемое количество, а наличие полосы при электрофоретическом разделении не позволяет оценить количественно результат.
В связи этим были разработаны методы для количественного ПЦР-анализа ГМИ: количественный конкурентный ПЦР (КК-ПЦР) и ПЦР в реальном времени (ПЦР-РВ).
Одним из первых количественных ПЦР-методов был КК-ПЦР (85, 90, 143). Данный метод базируется на ко-амплификации определенного участка ДНК-матрицы и определенного количества внутреннего стандарта (конкурента), представленный молекулой ДНК, несущей те же участки для