Пассивные и активные реакции эмбриональных тканей шпорцевой лягушки на действие внешних механических сил

• Автор: Мансуров, Андрей Николаевич
• Шифр специальности: 03.03.05
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2011
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 97 с. : ил.

I. Введение
I.1. Цели работы
II.Обзор литературы
II. 1 Представления о реакциях клеток и
тканей зародышей на механическое окружение
II. 1.1 Теория гипервосстановления
И. 1.2 Опыты, показывающие наличие
активного клеточного ответа на механическое окружение
11.1.3 “Сэндвичи Келлера”
II. 1.4 Миграция отдельных клеток
11.2. Механика гаструляции
11.3. Интеркаляция
11.4. Механозависимость гаструляции
11.4.1. Молекулярные механизмы
механорецепции и регуляции клеточного ответа
11.5. Биомеханика
11.6. Физические характеристики упругости
Закон Гука
II.7 Измерение упругого модуля
биологических объектов и механические характеристики живых систем.
11.7.1. Актиновые сети и промежуточные
филаменты
11.7.2. Фибронектин
11.7.3 Клетки и надклеточные структуры
И.7.4. Альтернативный подход к
определению упругости биологических объектов
II.8. Выводы
III. Материалы и методы
III.1. Приготовление растворов
Ш.2. Получение зародышевого материала
III.3 Изготовление гистологических срезов
(6,5мкм)
Ш.4. Изготовление полутонких срезов (2,5
мкм)
111.5. Сканирующая электронная
микроскопия
111.6. Конфокальная микроскопия
Ш.7. Операции на зародышах и обработка
результатов
III.7.1. Постановка опытов по растяжению
двойных эксплантатов супрабластопоральной области.
Ш.7.2. Обработка результатов опытов по
растяжению двойных эксплантатов супрабластопоральной области
Ш.7.2.1. Обработка результатов,
полученных на основании анализа гистологических срезов залитых в парафин объектов
III.7.2.2 Обработка результатов,
полученных с помощью сканирующей электронной микроскопии
Ш.7.3. Методы и операции по
воздействию на целый зардыш Хепориз 1аеу1з известной тянущей силой и анализу последствий этого воздействия
Ш.7.3.1. Общая схема эксперимента
Ш.7.3.2. Типы опытов
Ш.7.4. Обработка результатов опытов по
втягиванию зародышей в капилляр
III.7.4.1. Расчеты силы воздействия
III.7.4.3. Расчет модуля упругости
оболочки на растяжение
Ш.7.4.4. Оценка поведения клеток на
поверхности не втянутой части зародыша
Ш.7.4.5. Оценка поведения клеток на
втянутой части зародыша
IV. Результаты и обсуждение
IV. 1. Результаты опытов по растяжению
двойных эксплантатов супрабластопоральной области шпорцевой лягушки Хепорш 1аеу1з
IV. 1.1. Зависимость морфологии
эксплантатов от степени и длительности их растяжения
IV. 1.2. Динамика поляризации клеток в
эксплантатах различных сроков растяжения.
1У.2. Результаты опытов по втягиванию
зародышей в капилляр и определение модуля упругости
1У.2.1. Общее описание динамики
втягивания зародышей на стадии средней гаструлы
1У.2.2. Морфометрия
Г/.2.3. Влияние ингибиторов
актомиозинового сокращения и сборки микротрубочек
Оборудование: для воздействия на зародыш малой тянущей силой был сконструирован прибор, по мере понижения давления в котором зародыш мог втягиваться в капилляр заданного диаметра. Прибор состоял из одного резервуара с воздухом и двух капилляров с обоих его когщов. Капилляр с одного конца заполнялся маслом и соединялся с иньектором, а с другого погружался в среду с эмбрионами ММЯ(рис. 6).
воздухом
Рис. 6. Схема прибора. На рисунке участки А-В: часть капилляра со средой и всасываемым в него эмбрионом, В-С: отсеки с воздухом, C-D: часть капилляра с малом и входящим в него иньектором.
Оба капилляра имели внутренний радиус - 330 мкм, наружный - 500 мкм. Объем баллона с воздухом - 348,3 мм3, объем капилляра, погруженного в MMR - 33,2 мм3 (97 мм в длину), а объем капилляра, заполняемого маслом - 13,7 мм3 (40 мм в длину, где масло заполняло 30±5 мм капилляра).
Из-за того, что капилляр, погружаемый в MMR, имел малый диаметр и большую длину (в рамках всей системы) в нем создавались устойчивые неоднородности в давлении воздуха, изменяемые при сдвиге иньектором масляного столбика. Капилляр, заполняемый маслом, имел меньшую длину и заполнялся маслом так, чтобы зона, заполненная воздухом, не превышала 7 мм. Таким образом, эффект газовых неоднородностей существовал только в погруженном в MMR капилляре. В результате получалось, что повышение или понижение давления в резервуаре приводит к увеличению/уменьшению столбика жидкости А-В только если давление на всем протяжении длинного