Выявление и активация in vitro скрытых регенерационных потенций сетчатки глаза позвоночных животных

• Автор: Новикова, Юлия Петровна
• Шифр специальности: 03.03.05
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2010
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 204 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ ВВЕДЕНИЕ
ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1. Развитие глаза позвоночных животных
2. Организация сетчатки позвоночных
3. Организация пигментного эпителия позвоночных
4. Регенерация сетчатки глаза
4.1. Внутренние источники регенерации сетчатки
4.1.1. Внутренний источник регенерации клеток нейральной
сетчатки рыб
4.1.2. Внутренний источник регенерации клеток нейральной 24 сетчатки у бесхвостых амфибий.
4.1.3. Потенциальный внутренний источник регенерации клеток 27 нейральной сетчатки у хвостатых амфибий.
4.1.4. Клетки Мюллеровской глии, как источник регенерации 33 клеток сетчатки у позвоночных животных.
4.1.5. Способность к регенерации сетчатки у птиц и 35 млекопитающих.
5. Феномен трансдифференцировки клеток РПЭ в клетки сетчатки
5.1 .Регенерация нейральной сетчатки из
трансдифференцирующихся клеток ПЭС у тритонов.
5.2. Свойства клеток пигментного эпителия сетчатки
млекопитающих и его превращения в развитии и при патологии.
6. Модели культивирования тканей сетчатки и пигментного 61 эпителия глаза.
7. Использование антиоксидантов, как способ увеличения 66 жизнеспособности тканей глаза в условиях культивирования in
vitro и при патологии in vivo.
8. Влияние факторов роста на регенерацию тканей глаза
МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ
РЕЗУЛЬТАТЫ
1. Ротационное культивирование ретинального пигментного 89 эпителия тритона.
1.1 .Морфология культивированного РПЭ
1.2.Изучение включения БрДУ в клетки РПЭ
1.3. Экспрессия пан-нейральных белков клетками РПЭ
1.4. Влияние фактора роста фибробластов (РОБ) на РПЭ тритона при 94 ротационном культивировании.
2. Ротационное культивирование РПЭ взрослой крысы
2.1. Морфология культивированного РПЭ
2.2. Выявление клеточной гибели
2.3. Выявление пролиферативной активности, с помощью 100 предшественника синтеза ДНК БрДУ (ВгсШ) в клетки РПЭ.
2.4. Экспрессия пронейральных белков клетками РПЭ. Ю1
2.5. Протекторное действие антиоксиданта ББСД на РПЭ крысы при Ю1 ротационном культивировании.
3. Ротационное культивирование нейральной сетчатки тритона
3.1. Морфологические изменения в культивированной сетчатке
3.2. Пролиферативная активность клеток культивированной 112 сетчатки тритона.
3.3. Экспрессия белков - маркеров специфических клеточных 114 типов.
3.4. Влияние антиоксиданта БкСД при ротационном 116 культивировании изолированной сетчатки взрослого тритона.
3.5. Изучение профиля генов, кодирующих маркерные 118 специфические и регуляторные белки, при ЗБ роллерном культивировании тканей глаза взрослого тритона.
4. Ротационное культивирование сетчатки крысы
4.1. Морфологические изменения в культивированной сетчатке
4.2. Изучение пролиферативной активности клеток

культивированной сетчатки.
4.3. Экспрессия белков - маркеров специфических клеточных 129 типов.
5. Исследование пула пролиферирующих клеток в сетчатке тритона 130 после искусственной отслойки in situ.
5.1. Исследование локализации и накопления ДНК-синтезирующих 130 клеток в сетчатке тритона с использованием многократного
мечения 3Н-тимидином.
5.2. Изучение пролиферирующих клеток в сетчатке тритона с
помощью насыщения BrdU.
ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
1. Эксперименты in vitro
1.1. Ротационное культивирование РПЭ тритона и крысы
1.2. Ротационное культивирование сетчатки тритона и крысы
2. Эксперименты in vivo
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

предшественников палочек, авторы неожиданно обнаружили пролиферирующие клетки Мюллера, мигрирующие в НЯС. Так возникло предположение об еще одном альтернативном источнике регенерации сетчатки у рыб - мюллеровской глии или ассоциированных с ней клеток. Что лее касается клеток предшественников палочек, то здесь, как предположили авторы, также есть основания полагать, что их источник, в свою очередь, исходно локализован в ВЯС, но обладает способностью к миграции вдоль радиальных отростков Мюллеровских клеток (Braisted et al., 1994). Эти предположения находят документированные подтверлсдения (Raymond, Hitchcock, 1997; Wu et al., 2001). В настоящее же время, окончательно доказав потенции макроглиальных клеток сетчатки рыб не только к увеличению собственной популяции для поддержания сетчатки при повреждении, но и к ограниченному воспроизводству новых нейронов или их предшественников, исследования переведены в плоскость поиска компонентов ниши для перехода клеток Мюллера к фазе воспроизведения (Raymond et al., 2006; Raymond, 2008).
4.1.5. Способность к регенерации сетчатки у птиц и млекопитающих.
Долгое время существовало убеждение, что сетчатка теплокровных животных не способна к регенерации. В отношении сетчатки цыпленка, полагали, что она способна к восстановлению только на ранних стадиях развития (Coulombre, Coulombre, 1965; Park, Hollenberg, 1989,1991,1993; Willbold, Layer, 1991; Prada et al., 1991). У взрослых же птиц наблюдалось ограничение всех регенерационных возможностей сетчатки, связанное, по-видимому, с установлением синаптических контактов в tectum opticum и ограничениями, со стороны сформированного устойчивого микроокружения (Mey, Thanos, 1991). Однако в начале этого века было обнаружено, что в краевой зоне сетчатки все же находятся клетки, способные, продуцировать новые нейроны в процессе позднего развития цыпленка вплоть до взрослого состояния (Fisher, Reh, 2000). Так пролиферация клеток краевой зоны нормального глаза цыплёнка на стадии после вылупления является