Защитное действие модуляторов эндогенной каннабиноидной системы при экспериментальной церебральной ишемии

• Автор: Генрихс, Елизавета Евгеньевна
• Шифр специальности: 03.03.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2012
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 144 с. : ил.

ЗАЩИТНОЕ ДЕЙСТВИЕ МОДУЛЯТОРОВ ЭНДОГЕННОЙ КАННАБИНОИДНОЙ СИСТЕМЫ ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ ЦЕРЕБРАЛЬНОЙ ИШЕМИИ
СОДЕРЖАНИЕ
Глава 1. Введение
Список применяемых сокращений
Глава 2. Обзор литературных данных.
2.1. Общее представление об эндогенной каннабиноидной системе. История изучения и методы исследования
2.2. Синтез и распад эндоканнабиноидов
2.2.1. Биосинтез эндоканнабиноидов
2.2.2. Инактивация эндоканнабиноидов
2.3. Основные механизмы ишемического повреждения нейронов головного мозга
2.4. Участие эндоканнабиноидов в регуляции и модуляции синаптической передачи
2.4.1. Сопряженность каннабиноидных рецепторов с каскадами сигнальных реакций
2.4.2. Участие эндогенной каннабиноидной системы в регуляции синаптической передачи
2.4.3. Ретроградная модуляция синаптической передачи эндоканнабиноид ами
2.5. Нейропротекторное действие эндоканнабиноидов in vitro и in vivo и возможность их терапевтического применения
2.5.1. Нейропротекция in vivo
2.5.2. Нейропротекция in vitro
2.5.3. Новые подходы к разработке препаратов, влияющих на внутриклеточные деструктивные процессы, индуцированные возбуждающими аминокислотами, и возможность терапевтического применения эндоканнабиноидов

Глава 3. Материалы и методы исследования.
3.1. Объекты исследования
3.2. Реактивы
3.3. Получение мембранного препарата из мозга крысы
3.4. Методы получения и культивирования диссоциированных клеток различных структур мозга
3.4.1. Приготовление субстратов для культивирования клеток
3.4.2. Получение и культивирование диссоциированных монослойных культур мозжечка крыс
3.4.3. Получение и культивирование диссоциированных монослойных культур новой коры и гиппокампа мышиных эмбрионов
3.4.4. Культивирование диссоциированных монослойных культур гиппокампа на мультиэлектродной матрице
3.5. Методы выделения и культивирования органотипических срезов гиппокампа
3.6. Иммунногистохимическая идентификация каннабиноидных рецепторов 1-го и 2-го типа (КР1 и КР2) в диссоциированной культуре клеток-зерен мозжечка крысы
3.7. Схемы проведения экспериментов
3.7.1. Эксперименты на диссоциированных монослойных культурах клеток-зерен мозжечка крысы
3.7.2. Схема экспериментов на диссоциированных монослойных культурах нейронов новой коры мышей
3.7.3. Схема экспериментов на органотипических эксплантатах гиппокампа
3.7.4. Схема экспериментов на диссоциированных клетках гиппокампа, культивированных на мультиэлектродной матрице
3.7.5. Схема экспериментов in vivo
3.7.6. Электронно-микроскопическое исследование
3.8. Статистический анализ

Глава 4. Результаты исследования.
4.1. Нейропротекторное действие модуляторов ЭКС in vitro
4.1.1. Нейропротекторное действие N-ацилдофаминов при индукции апоптоза в культуре клеток мозжечка
4.1.2. Иммуногистохимическая идентификация каннабиноидных рецепторов в культуре клеток мозжечка
4.1.3. Нейропротекторные эффекты N-ацилдофаминов при цитотоксическом действии глутамата в культуре клеток новой коры
4.1.4. Нейропротекторные свойства N-докозагексаеноилдофамина при цитотоксическом действии глутамата в органотипической культуре ткани гиппокампа
4.1.5. Эффекты от добавления глутамата и N-ацилдофаминов к клеткам нейронной сети первичной культуры гиппокампа
4.1.6. Нейропротекторное действие N-ацилдофаминов при их совместном применении с ингибиторами гидролазы амидов жирных кислот
4.1.7. Нейропротекторные свойства метаболита эндогенного каннабиноида
анандамида простамида Е2
4.2. Нейропротекторное действие модуляторов ЭКС in vivo
4.2.1. Патогистологическое исследование
4.2.2. Электронно-микроскопическое исследование
Глава 5. Обсуждение результатов.
5.1. Нейропротекторное действие модуляторов ЭКС in vitro
5.1.1. Нейропротекторное действие N-ацилдофаминов при индукции апоптоза в культуре клеток мозжечка и при цитотоксическом действии глутамата в культуре клеток новой
коры
5.1.2. Нейропротекторные свойства N-докозагексаеноилдофамина при цитотоксическом действии глутамата в органотипической культуре ткани
нейропротекторные эффекты, клинические испытания большинства из них были прекращены из-за широкого спектра серьезных побочных проявлений (психических, локомоторных, общих токсических). Использование менее токсичных низкоафинных и селективных антагонистов NMDA-рецепторов, а также антагонистов пресинаптических натриевых каналов не установило достоверного их влияния на течение и исход заболевания, в связи с чем клинические испытания были также прекращены.
По результатам экспериментальных работ, проведенных на моделях острой фокальной ишемии, перспективным направлением нейропротекции является коррекция дисбаланса возбуждающих и тормозных нейротрансмиттерных систем с помощью активации естественных тормозных процессов. Гипоксическое/ишемическое повреждение индуцирует генные, сигнальные пути, которые осуществляют нейропротекторные эффекты и могут помочь в ограничении повреждения от инсульта (Clemens, 2000).
В последнее время многие исследования направлены на поиск доказательств, что ЭКС играет важную нейропротекторную роль при нейрональных повреждениях, будь то острые, такие как ишемия и травма, или хронические заболевания, например, болезнь Альцгеймера. Недавно было обнаружено, что синтетические каннабиноиды могут снижать нейрональную потерю после глобальной церебральной ишемии и способствуют тому, что зона инфаркта после фокальной ишемии в мозге крыс меньше, чем в контрольной группе. Кроме того, многими авторами был установлен защитный эффект Д9-ТГК и синтетических аналогов в моделях ишемии, использующих нейрональные клеточные культуры. Защитные свойства экзогенных каннабиноидов и существование эндоканнабиноидных сигнальных путей наводят на мысль, что ЭК могут быть эндогенными нейропротекторами при ишемии, однако, эта гипотеза требует более прямых доказательств. С другой стороны, есть ряд фактов, которые следует также тщательно проанализировать. Во-первых, уровень ЭК, достигаемый при