Молекулярно-генетическое изучение рака молочной железы

• Автор: Фарахтдинова, Альбина Рауфовна
• Шифр специальности: 03.02.07
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2012
• Место защиты: Уфа
• Количество страниц: 193 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ И УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ
ВВЕДЕНИЕ
ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
ЕЕ Факторы риска развития рака молочной железы (РМЖ)
Е2. Эпигенетические изменения при РМЖ
1.3. Клеточный ответ на повреждения ДНК
1.4. Гены с высокой пенетрантностью, ответственные за наследственную 120 предрасположенность к РМЖ
1.4.1. Ген BRCA1(Breast cancer 1 gene)
1.4.2. Ген BRCA2 (Breast cancer 2 gene)
1.4.3. Роль ВЯСА1 и ВЯСА2 в репарации двунитевых разрывов и контроле 24 клеточного цикла
1.4.4. Анализ мутаций в генах BRCA1 и BRCA2 в различных популяциях 25 мира
1.5. Гены с умеренной пенетрантностью, вовлеченные в патогенез рака
молочной железы
1.5.1. Ген Л ГМ (Ataxia-Telangiectasia Mutated)
1.5.2. Г ен NBN (NBS1, Nijmegen breakage syndrome)
1.5.3. Ген СНЕК2 (Checkpoint kinase 2)
1.6. Анализ ассоциаций полиморфных вариантов с РМЖ
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1. Материалы исследования
2.2. Молекулярно-генетические методы
2.2.1. Выделение ДНК из периферической крови
2.2.2. Полимеразная цепная реакция синтеза ДНК
2.2.3. Аллель-специфичная ПЦР
2.2.4. Рестрикционный анализ
2.2.5. Определение нуклеотидной последовательности ДНК
2.2.6. ПЦР в реальном времени
2.3. Статистические методы
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
3.1. Анализ мутаций в гене ВЯСА1 у больных раком молочной железы
3.1.1. Скрининг мутации 5382тзС (с.5266ёирС) в гене ВЯСА1
3.1.2. Скрининг мутации 300Т>6 (с.181Т>0, р.СбЮ) в гене ВВС А1
3.1.3. Скрининг мутации 4153с1с1А (с.4034с1е1А) в гене ВЯСА1
3.1.4. Анализ мутаций 5382тзС, 4153йе1А и р.СбШ в гене ВЯСА1 у 53 больных РМЖ
3.2. Анализ мутации 6174с1е1Т (с.5946йе1Т) в гене ВЯСА2 у больных РМЖ
3.3. Анализ мутаций в гене СНЕК2 в выборке больных РМЖ и в группе 59 контроля
3.3.1. Скрининг мутации 1100с1е1С в гене СНЕК2 у больных РМЖ и в 59 контрольной группе
3.3.2. Скрининг мутации ГУ5!2+Ш>А в гене СНЕК2 у больных РМЖ и в 61 контрольной группе
3.3.3. Скрининг мутации СНЕК2с1е/е9,10(5кЪ) у больных РМЖ и в 63 контрольной группе
3.3.4. Анализ полиморфного варианта И57Т в гене СНЕК2 у больных 64 РМЖ и в контрольной группе
3.3.5. Анализ мутаций ПООйеЮ, 1Д>2+Щ, СНЕК2с1е1е9,10(5кЬ) в гене 68 СНЕК2
3.4. Анализ мутации с.59320>Т в гене АТМ у больных РМЖ и в 70 контрольной группе
3.5. Анализ мутаций с.657йе15 и р.К215¥ в гене ЫВЫ у больных РМЖ и в 73 контрольной группе.
3.5.1. Скрининг мутации с.657йс15 в гене ЫВЫ
3.5.2. Скрининг мутации с.643С>Т (р.И215¥) в гене 1'ВМ
3.6. Комплексный анализ мутаций в генах ВКСА1, СНЕК2, АТМ, ИВЫ у 79 больных раком молочной железы

3.7. Анализ ассоциаций полиморфных локусов га2981582 гена FGFR2, 85 га13387042 в области 2q35, га889312 гена МАРЗК1, гаЗ803662 в регионе 16ql2, 10941679 в области 5р12, га4973768 гена SLC4A7, rs6504950 гена
STXBP4, га1982073 гена TGFbl, га3817198 гена LSP1, га1607237 в гене PIK3CA, гу 1045485 гена CASP8 и /уу 13281615 в регионе 8q24 с раком молочной железы
3.7.1. Анализ ассоциации полиморфного варианта rs2981582 (ОТ) в гене 86 FGFR2 с раком молочной железы
3.7.2. Анализ ассоциации полиморфного локуса га!3387042 (G>A) в
• области 2q35 с раком молочной железы
3.7.3. Анализ ассоциации полиморфного варианта га889312 (А>С) в гене 95 МАРЗК1 с раком молочной железы
3.7.4. Анализ ассоциации полиморфного варианта га3803662 (ОТ) в 101 области 16ql2 с раком молочной железы
3.7.5. Анализ ассоциации полиморфного варианта га10941679 (A>G) в 106 области 5р12 с раком молочной железы
3.7.6. Анализ ассоциации полиморфного варианта га4973768 (ОТ) в 111 области Зр24 с раком молочной железы
• 3.7.7. Анализ ассоциации полиморфного варианта га6504950 (G>A) в гене 114 STXBP4 с раком молочной железы
3.7.8. Анализ ассоциации полиморфного варианта L10P, га 1982073 (Т>С) в 118 гене TGF/31 с раком молочной железы
3.7.9. Анализ ассоциации полиморфного варианта га3817198 (Т>С) в гене 122 LSP1 с раком молочной железы
3.7.10. Анализ ассоциации полиморфного варианта га13281615 (Т>С) в 126 области 8q24 с раком молочной железы
3.7.11. Анализ ассоциации полиморфного варианта D302H, га1045485 130 ' (G>C) в гене CASP8 с раком молочной железы
3.7.12. Анализ ассоциации полиморфного варианта га1607237 в гене 134 PIK3CA (Т>С) с раком молочной железы

происходит быстрая опосредованная протеосомами деградация Cdk2, что ведет к задержке поздней G1 и S-фазы цикла [Falck J. et al., 2001].
Другой мишенью СНЕК2-киназы является BRCA1. После воздействия у-излучения СЬк2киназа фосфорилирует BRCA1 в Ser988, что необходимо для высвобождения BRCA1 от комплекса с СНЕК2. Протеин BRCA1 связывает белки Rad50, Rad51, BRCA2, ответственные за гомологичную рекомбинацию [Lee J. et al., 2000].
Некоторые исследователи сообщают, что в ответ на повреждение ДНК СНЕК2 регулирует деятельность фактора транскрипции E2F1 [Stevens C. et al., 2003]. СНЕК2 фосфорилирует E2F-1, вызывая стабилизацию белка, активирует транскрипцию, а также способствует локализации фосфорилата E2F1 в дискретных ядерных структурах. Экспрессия доминирующего-негативного мутантного СНЕК2 блокирует индукцию E2F-1 и предотвращает E2F-1-зависимый апоптоз [Stevens C. et al., 2003].
В последних работах показано, что экспрессия E2F1 приводит к увеличению уровня протеина СНЕК2, и это может быть существенным для активации р53 и индукции апоптоза [Rogoff FI. et al., 2004]. Эктопическая экспрессия E2F1 вызывает фосфорилирование ATM-зависимого СНЕК2 и стимулирует деятельность СНЕК2-киназы [Powers J. et al., 2004]. NBN -также необходимый элемент для фосфорилирования СНЕК2, активизированного E2F1 [Powers J. et al., 2004].
Более того, СНЕК2 играет критическую роль в индукции проапоптического транскрипционного фактора р73, следующей после повреждения ДНК [Urist М. et al., 2004]. Кроме того, активизированный СНЕК2 регулирует PML-зависимый апоптоз, индуцированный у- излучением [Rogoff H. et al., 2004].
Таким образом, функционально СНЕК2 является одним из ключевых компонентов сигнальных путей, направленных на сохранение генетической стабильности, регуляцию клеточного цикла, репарацию ДНК и апоптоз.