Антагонистическая активность штамма Bacillus subtilis ИБ-54 к дерматомицетам и его использование в разработке антимикотического препарата

• Автор: Гиззатуллина, Светлана Вадимовна
• Шифр специальности: 03.01.06, 03.02.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2012
• Место защиты: Уфа
• Количество страниц: 124 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

ВВЕДЕНИЕ
СПИСОК ПРИНЯТЫХ СОКРАЩЕНИЙ
1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1Л. Антагонистическая активность аэробных спорообразующих бактерий как одна из форм взаимоотношений с мицелиальными грибами
1.2. Основные механизмы подавления роста и развития микромицетов бациллами-антагонистами
1.3. Опыт практического применения бацилл-антагонистов в медицине
1.4. Лекарственные формы на основе бацилл для наружного применения
1.5. Актуальность биологического контроля дерматомицетов микробами-антагонистами и их метаболитами
1.5.1. Возбудители дерматомикозов и проблемы борьбы с ними
1.5.2. Особенности экологии дерматомицетов и факторы их патогенности
1.5.3. Биологическая активность микробов-антагонистов в отношении дерматомицетов
2. ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
2.1. Объекты исследований
2.2. Методы и условия хранения и поддержания бактериальной культуры и дерматомицетов
2.3. Условия глубинного культивирования бактерий
2.4. Определение общего белка
2.5. Изучение генотипических свойств В. яиЫШз ИБ
2.6. Анализ антагонистической активности штамма В. яиЫШз ИБ-54 в отношении патогенных бактерий и дерматомицетов
2.7. Световая микроскопия

2.8. Оценка влияния параметров культивирования на рост и продукцию антимикотических соединений В. subtilis ИБ
2.9. Очистка и аминокислотный анализ фракции активных метаболитов В. subtilis ИБ
2.10. Характеристика физико-химических и биологических свойств антимикотических соединений В. subtilis ИБ
2.11. Определение чувствительности В. subtilis ИБ-54 к антибиотикам
2.12. Изучение биологической безопасности штамма В. subtilis ИБ
2.13. Разработка состава и технологии экспериментальной лекарственной формы наружного применения на основе В. subtilis ИБ
2.14. Изучение специфической активности разработанного гелевого препарата на основе В. subtilis ИБ-54 in vitro
2.15. Методы изучения стабильности экспериментального препарата при хранении
2.16. Оценка эффективности экспериментальной лекарственной формы in vivo (доклинические испытания)
2.17. Статистическая обработка результатов
3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
3.1. Фенотипическая и генотипическая характеристика В. subtilis ИБ
3.2. Антимикотическая активность В. subtilis ИБ-54 и особенности его антагонистического действия на дерматомицеты
3.3. Антагонизм В. subtilis ИБ-54 в отношении представителей патогенной и условно патогенной микробиоты
3.4. Антагонистические взаимоотношения В. subtilis ИБ-54 с таксономически близкими и отдаленными штаммами бацилл
3.5. Рост и биосинтез антимикотических соединений В. subtilis ИБ
в монокультуре и в бинарных культурах с дерматомицетами
3.5.1. Специфика совместного развития и антагонистической
активности В. subtilis ИБ-54 и дерматомицетов

3.6. Влияние природы и концентрации источников углерода на рост и антимикотическую активность В. subtilis ИБ
3.7. Влияние источников азота на рост и синтез антимикотических соединений В. subtilis ИБ
3.8. Выделение и характеристика антимикотических соединений В. subtilis ИБ
3.9. Устойчивость В. subtilis ИБ-54 к антибиотикам
3.10. Биологическая безопасность штамма В. subtilis ИБ-54 как потенциальной основы препаратов наружного действия для лечения дерматомикозов
3.10.1. Характеристика вирулентных, токсигенных и токсичных свойств изучаемого штамма
3.10.2. Острая и хроническая токсичность В. subtilis ИБ
3.9.3
3.11. Разработка гелевой лекарственной формы на основе В. subtilis ИБ-54 для профилактики и лечения дерматомикозов
3.11.1. Обоснование состава геля и подбор основных компонентов
3.11.2. Стабильность экспериментальной лекарственной формы при хранении
3.11.3. Эффективность экспериментальной лекарственной формы in vitro и in vivo
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

Дистиллированная вода - до 1000.
Значение pH в среде перед автоклавированием - 6,6-6,7. Глицерин стерилизовали отдельно в виде 2,5%-ного водного раствора. Культивирование проводили в конических колбах объемом 250 мл на качалке УВМТ-12-250 при 170 об'1 и 36,0±0,5°С в течение 72 ч. При изучении динамики роста штамма и секреции им антимикотических соединений культивирование осуществляли в течение 144 ч. Степень споруляции бактериальных клеток определяли методом серийных разведений из прогретой жидкой культуры (15 мин при +80°С).
2.4. Определение общего белка
Концентрацию суммарного белка в КЖ В. эиЫШз ИБ-54 определяли методом Кристиана - Варбурга [16] по поглощению при 280 нм, с учетом коэффициента поправки на поглощение нуклеиновых кислот при 260 нм.
2.5. Изучение генотипических свойств В. ниЫИЫ ИБ
Таксономическую принадлежность штамма В. тЫШз ИБ-54 уточняли на основе филогенетического анализа последовательности гена, кодирующего малую субъединицу рРНК (16Б рРНК). В качестве матрицы для амплификации использовали геномную ДНК штамма ИБ-54, получаемую методом фенольной экстракции, с последующей многократной очисткой смесью фенол-хлороформ-изоамиловый спирт (25:24:1). Концентрацию экстрагированной ДНК определяли спектрофотометрически при 260 нм из расчета, что в кювете толщиной 1 см оптическая плотность О2бо = 1 соответствует приблизительно 50 мкг/мл двухцепочечной ДНК, а ее чистоту оценивали исходя из соотношения Огбо/Огяо- Амплификацию гена 16Б рРНК осуществляли методом ПЦР с использованием универсальных для большинства прокариот концевых