Разработка и сравнительная характеристика систем экспрессного иммунохимического определения микотоксинов

• Автор: Урусов, Александр Евгеньевич
• Шифр специальности: 03.01.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2012
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 125 с. : ил.

Оглавление
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
ВВЕДЕНИЕ
Глава 1. Обзор литературы
1.1. Разнообразие микотоксинов и их распространение
1.2. Методы определения микотоксинов
1.3. Характеристика иммунохимичееких методов анализа микотоксинов
1.4. Иммуноаффииные колонки
1.5. Иммуноферментный анализ
1.6. Иммунофильтрация
1.7. Иммунохроматографические тесты
1.8. Поляризационный флуоресцентный анализ
1.9. Иммуносенсоры на основе поверхностного плазмонного резонанса
1.10. Электрохимические иммуносенсоры
1.11. Пьезоэлектрические сенсоры
1.12. Коммерческие иммуноаналитические системы
Глава 2. Материалы и методы
2.1. Материалы
2.2. Биотиншшрование антител
2.3. Иммуноферментный анализ микотоксииов
2.4. Характеристика иммунохимического взаимодействия
с использованием проточной сенсорной системы Віасоге X
2.5. Синтез конъюгатов коллоидного золота с антителами
2.6. Изготовление и хранение иммунохроматографических тест-полосок
2.7. Проведение иммунохроматографического анализа охратоксина А
и афлатоксина В1
2.8. Усиление сигнала коллоидным золотом в проточной сенсорной системе
Віасоге X
2.9. Иммунохроматографический анализ афлатоксина В1 с усилением сигнала
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
Глава 3. Изучение свойств реагентов,
используемых в нммуноаналитических системах
3.1. Характеристика антител против микотоксинов методом
иммуноферментного анализа

3.2. Сравнение способов введения метки в иммуноферментных
системах определения микотоксинов
3.3. Оптимизация продолжительности стадий иммуноферментного анализа
3.4. Оптимизация концентрации метанола для иммуноферментного
анализа проб, содержащих микотоксины
3.5. Исследование иммунохимических взаимодействий с использованием
оптического сенсора Biacore
Глава 4. Синтез и характеристика конъюгатов специфических антител
с коллоидным золотом
4.1. Характеристика состава конъюгатов антитела - коллоидное золото
4.2. Характеристика иммунохимических свойств конъюгатов антитело-
коллоидное золото, основанная на определении эквивалентного количества свободных антител
4.3. Сравнение конъюгатов антитела - коллоидное золото разного состава
в иммунохроматотрафическом анализе
Глава 5. Разработка иммунохроматографических тест-систем
определения охратоксина А и афлатоксина В1
5.1. Выбор оптимальных рабочих мембран для иммунохроматографического
определения микотоксинов
5.2. Сравнение и выбор мембран для тестируемого образца
5.3. Апробация иммунохроматографических тест-систем
для определения микотоксинов в растительных экстрактах
Глава 6. Усиление сигнала в иммуноанализе коллоидным золотом
6.1. Применение коллоидного золота для усиления сигнала
в иммуносенсорном анализе
6.2. Иммунохроматографический анализ с разделением стадий
специфического взаимодействия и введения коллоидного маркера
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
АГ — антиген
антиАТ - антивидовые антитела
АТ - антитело
АФВ1 - афлатоксин В1
БСА - бычий сывороточный альбумин
ВЭЖХ - высокоэффективная жидкостная хроматография
ГХ - газовая хроматография
ДОН - дезоксиниваденол
ЖХ/МС - жидкостная хроматография с масс-спектрометрией
ЗХВК - золотохлористоводородная кислота
ИФА - иммуноферментный анализ
ИХ А - иммунохроматографический анализ
КЗ - коллоидное золото
ОТА - охратоксин А
о.е. - относительная единица
ППР - поверхностный плазмонный резонанс
ТБСА - 10 мМ трис-буфер, pH 8.5, с 1% БСА и 1% сахарозы
ТМБ - 3,3',5,5'-тетрамєтшібегоидин
ТСХ - тонкослойная хроматография
ФБС - 50 мМ К-фосфатный буфер, pH 7,4, содержащий 0,1 М ЫаС1
ФБСТ - ФБС, содержащий 0,05% Тритона Х
ЕІЗС - 1-этил-3-(3-диметиламинопропил) карбодиимида гидрохлорид
1ё(> - иммуноглобулин класса Є
МгВ - М-гидроксисукцинимид
ОБ - оптическая плотность
Ж і - резонансная единица

Рис. 12. Электрохимический сенсор с системой усиления сигнала на магнитных частицах. I - магнитные наночастицы; 2 - поверхность электрода; 3 - магнит
1.11. Пьезоэлектрические сенсоры
Пьезокварцевый сенсор представляет собой пластину тонко срезанного кристалла природного или синтетического а-кварца, на обеих сторонах которой сформированы электроды из разных металлов — А§, Аи, Рц А1, №, Сг (рис. 13). Под действием переменного тока кристалл начинает колебаться. При изменении массы на поверхности пластины частота колебаний изменяется, что и является регистрируемым аналитическим сигналом. Наибольшее распространение получили резонаторы с собственной частотой колебаний 5-15 МГц.
Рис. 13. Пьзоэлектрический иммуносенсор.
1 - биосовместимый слой; 2 - иммобилизованный конъюгат микотоксина с белком; 3 - антитела; 4 - кристалл кварца; 5 - электроды