Экспрессия глутатионпероксидазы и глутатионредуктазы при оксидативном стрессе различной этиологии

• Автор: Искусных, Игорь Юрьевич
• Шифр специальности: 03.01.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2012
• Место защиты: Воронеж
• Количество страниц: 180 с. : ил.

Содержание
ВВЕДЕНИЕ
ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.Свободнорадикальное окисление биомолекул и система антиоксидантной защиты
1 Л. Свободные радикалы и оксидативный стресс
1.2. Антиоксидантная система защиты
1.2.1.Ферментативные и неферментативные звенья антиоксидантной защиты
1.2.2.Роль глутатионредуктазы в механизмах защиты от клеточного стресса
1.2.3.Структурная организация и биохимические свойства глутатион-
пероксидаз
1.2.4. Физиолого-биохимическое значение глюкозо-6-фосфатдегидроге-назы
1.2.5. Кооперативность функционирования антиоксидантных ферментов
2. Патологии, сопряженные с оксидативным стрессом
2.1. Миокардит и его патогенез
2.1.2.Механизмы влияния адреналина на уровень свободных радикалов в клеточных системах
2.2.Токсическое поражение печени
2.2.1.Общая характеристика гепатитов
2.2.2.Метаболические нарушения при токсическом гепатите
2.3.Сахарный диабет и его типы
2.3.1.Свободнорадикальное окисление в патогенезе сахарного диабета
2.4. Пероксид водорода как индуктор оксидативного стресса
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
ГЛАВА 2. ОБЪЕКТ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2Л. Объект исследования
2.2. Методы исследования
2.3. Индукция экспериментального токсического гепатита
2.4. Создание модели адреналинового миокардита
2.5. Моделирование сахарного диабета 2-го типа
2.6. Получение тканевых гомогенатов
2.7. Определение интенсивности процессов свободнорадикального окисления биосубстратов методом биохемилюминесценции
2.8. Определение содержания диеновых конъюгатов
2.9. Определение активности глутатионредуктазы
2.1.0 Определение активности глутатионпероксидазы
2.1.1. Определение активности глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы
2.1.2. Определение активности аланинаминотрансферазы и аспартат-
аминотрансферазы
2.1.3.Определение активности креатинкиназы-МВ
2.1.4. Определение количества белка
2.1.5. Экстракция тотальной РНК тризоловым методом
2.1.6. Электрофорез РНК
2.1.7. Обратная транскрипция
2.1.8. ПЦР-амплификация в режиме реального времени
2.1.9. Определение уровня экспрессии генов глутатионредуктазы, глутатионпероксидазы и глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы
2.2.0. Электрофорез ДНК
2.2.1. Среды для работы с культурами клеток
2.2.2. Оценка метаболической активности и жизнеспособности клеток
2.2.3. Оценка степени развития апоптоза в клеточной культуре фибробластов
2.2.4. Корреляционно-регрессионный анализ
2.2.5.Статистическая обработка экспериментальных данных
ГЛАВА 3. ИНТЕНСИВНОСТЬ СВОБОДНОРАДИКАЛЬНЫХ ПРОЦЕССОВ И ЭКСПРЕССИЯ ГЛУТАТИОНПЕРОКСИДАЗЫ И ГЛУТАТИОНРЕДУКТАЗЫ В СЕРДЦЕ КРЫС В ДИНАМИКЕ РАЗВИТИЯ АДРЕНАЛИНОВОГО МИОКАРДИТА
3.1. Активность ферментов-маркеров цитолиза кардиомиоцитов в сыворотке крови крыс при развитии адреналинового миокардита
3.2. Содержание диеновых конъюгатов в сердце крыс в динамике развития адреналинового миокардита
3.3. Динамика параметров биохемилюминесценции в сердце крыс при адреналиновом миокардите
3.4. Активность глутатионредуктазы и глутатионпероксидазы в сердце крыс в динамике развития адреналинового миокардита
3.5. Активность глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы в сердце крыс при адреналиновом миокардите
3.6. Корреляционный анализ активностей глутатионредуктазы, глутатионпероксидазы и интенсивности свободнорадикальных процессов при адреналиновом миокардите
3.7. Экспрессия глутатионредуктазы в сердце крыс при адреналиновом миокардите
3.8. Экспрессия глутатионпероксидазы в сердце крыс в при адреналиновом миокардите
3.9. Уровень экспрессии глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы в сердце крыс при
адреналиновом миокардите
ГЛАВА 4. ИНТЕНСИВНОСТЬ СВОБОДНОРАДИКАЛЬНОГО ОКИСЛЕНИЯ БИОСУБСТРАТОВ И ЭКСПРЕССИЯ ГЛУТАТИОНПЕРОКСИДАЗЫ И ГЛУТАТИОНРЕДУКТАЗЫ ПРИ ТОКСИЧЕСКОМ ПОРАЖЕНИИ
ПЕЧЕНИ КРЫС
4.1. Активность ферментов-маркеров цитолиза гепатоцитов в сыворотке крови крыс при токсическом поражении печени, индуцированном тетрахлорметаном

антиокислительной системы, но и играет важную роль в процессах биосинтеза простагландинов и лейкотриенов [39].
1.2.4. Физиолого-биохимическое значение глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы
Глюкозо-6-фосфатдегидрогеназа (Г6ФДГ) является ключевым ферментом, пентозофосфатного пути, обеспечивающего образование НАДФН, необходимого для поддержания уровня восстановленного глутатиона в клетке, синтеза жирных кислот и изопреноидов. У человека наследственное нарушение активности ГбФДГприводит к гемолитической несфероцитарной анемии.
Реакция катализируемая ферментом:
Б-глюкозо-6-фосфат + НАДФ+ Б-глюконо-1,5-лактон-б-фосфат + НАДФН Фермент состоит из 515 аминокислотных остатков (Мг = 59,3 кДа). Может существовать в димерной и тетрамерной форме.Существует 2 изоформы фермента: короткая и длинная. Короткая считается канонической как наиболее распространённая. Длинная версия отличается вставкой на месте аргинина-257:
КК0Р0Кд00808Е8С8Ь8Ь08ЬУУ0РНАБЕР0Е(200ЕЬШ1АЬА88УРК, что приводит к удлинению молекулы до 561 и увеличению молекулярной массы до 63,8 кДа.
Все ткани, в которых активность пентозофосфатного пути высока (эритроциты, тонкий кишечник, жировая ткань, печень, поджелудочная железа и тп) используют в реакциях восстановленного синтеза НАДФН, например в реакциях синтеза жирных кислот, стеройдов, аминокислот,С8Н [169, 110, 125].