Амидированность и окислительные модификации белков тканей крыс и сывороточного альбумина при модельном и физиологическом старении

• Автор: Дурканаева, Ольга Анатольевна
• Шифр специальности: 03.01.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2012
• Место защиты: Ростов-на-Дону
• Количество страниц: 148 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ с.
ВВЕДЕНИЕ
ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1Л. Основные теории старения
1.2.Посттрансляционные модификации белков
1.2 Л. Молекулярные механизмы дезамидирования
1.2.2. Возможные пути окислительной модификации белков
1.2.3. Роль неферментативного дезамидирования и других посттрансляционных
модификаций в процессах старения белков
1.3. Старение и интенсивность обновления белков в клетке
1.4. Типы клеток тканей позвоночных и процессы старения
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Материалы исследования и постановка эксперимента
2.2. Методы исследования
2.2.1. Выделение и очистка тканевых белков
2.2.2. Выделение и хроматографическая очистка препаратов сывороточного альбумина
2.2.3. Определение содержания белка методом Lowry (1951) в модификации Schaterle (1973)
2.2.4. Окислительная модификация сывороточного альбумина в среде Фентона (Дубинина Е.Е., 2000)
2.2.5. Определение содержания амидных групп белков флуорометрическим методом (Sugawara К., 1981) в модификации (Шепотиновская И.В., 1995)
2.2.6. Определение сульфгидрильных групп в белках колориметрическим методом при помощи 5,5'-дитиобис(2-нитробензойной) кислоты (ДТНБК) (Веревкина И.В., 1977)
2.2.7. Определение содержания карбонильных групп белков спектрофотометрическим динитрофенилгидразиновым методом (Дубинина Е.Е., 1995)
2.2.8. Определение образования битирозина и окисления триптофана в белках, инкубированных в среде Фентона (Дубинина Е.Е., 2000)
2.2.9. Исследование собственной флуоресценции белков препарата альбумина
2.2.10. Электрофорез препаратов альбумина после инкубации в среде Фентона (Laemmli, 1970)
2.3. Статистическая обработка результатов исследования

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
3.1. Возрастные изменения содержания амидных, сульфгидрильных и карбонильных групп в суммарных белках разных тканей белых крыс
3.1.1. Изменение содержания амидных групп суммарных белков тканей белых крыс при старении
3.1.2. Изменение содержания БН-групп в суммарных белках различных тканей крыс при их физиологическом старении
3.1.3. Карбонилирование суммарных белков различных тканей крыс при их
физиологическом старении
3.2. Изменения амидированности и окислительных модификаций
сывороточного альбумина старых крыс
3.2.1. Выделение и очистка сывороточного альбумина крыс
3.2.2. Амидированность сывороточного альбумина молодых и старых крыс
3.2.3. Окислительные модификации сывороточного альбумина крыс
3.3. Окислительные модификации и амидированность сывороточного альбумина при его инкубации в среде Фентона
3.3.1. Окислительные модификации сывороточного альбумина при его инкубации в среде Фентона
3.3.2. Изучение амидированности сывороточного альбумина, инкубированного в среде Фентона
3.3.3. Конформационные изменения сывороточного альбумина при его инкубации в
среде Фентона
3.4. Изменение амидированности и окислительных модификаций БСА при
инкубации в условиях, моделирующих физиологические
3.4.1. Изменение степени амидированности БСА при инкубации в условиях, моделирующих физиологические
3.4.2. Исследование процессов окислительной модификации препарата БСА при его инкубации в условиях, моделирующих физиологические
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
АА-МБА - акриламид-метилен-бис-акриламид
АКМ - активированные кислородные метаболиты
АО, АОС - антиоксиданты, антиоксидантная система
Асн, Асп - аспарагин, аспарагиновая кислота
АФК - активные формы кислорода
БСА - бычий сывороточный альбумин
Глн, Глу- глутамин, глутаминовая кислота
ДДС-Na - додецилсульфат натрия
ДНФГ - 2,4-динитрофенилгидразин
ДТНБК - 5,5'-дитиобис(2-нитробензойная) кислота
ДТТ - дитиотреитол
ЛАГ - легкогидролизуемые амидные группы
МДА - малоновый диальдегид
ОМБ - окислительная модификация белков
ОФА - орто-фталевый альдегид
ПААГ - полиакриламидный гель
ПОЛ - перекисное окисление липидов
ППЦ - полипептидная цепь
ПСА - персульфат аммония
ПТМ - посттрансляционные модификации
ПЭГ - полиэтиленгликоль
СА - сывороточный альбумин
САГ - суммарные амидные группы
СОД - супероксиддисмутаза
СР - свободные радикалы
СРО, СРП - свободнорадикальное окисление, свободнорадикальные процессы
ТАГ - трудногидролизуемые амидные группы
ТНС - тиолдисульфидное соотношение
ТНФА - тионитрофенильный анион
ТХУ - трихлоруксусная кислота
ЭТЦ - электронтранспортная цепь
AGE - Advanced Glycosylation End product
GSH -глутатион

Четвертая группа - высокодифференцированные клетки, не способные к делению (нервные и мышечные клетки). В этих клетках прослеживаются очевидные признаки старения (Фролькис В.В., 1991).
Существует ряд различных схем, предложенных для классификации клеток организма, но для наших целей удобно воспользоваться простой схемой, основанной на двух признаках - степени дифференцировки и способности к делению (см. схему 1).
Схема 1. Типы клеток и тканей позвоночных
Стволовые клетки менее специализированы и легко вступают в процесс деления. Они не являются в полном смысле «недифференцированными», так как их дальнейшая судьба в значительной степени определена. К этой категории относятся базальные клетки эпидермиса; они периодически делятся, и образующиеся дочерние клетки дифференцируются в кератинизированные клетки кожи. Для того, чтобы отличить клетки этого типа, которые фактически «частично дифференцированы», от истинных эмбриональных тотипотентных клеток, некоторые авторы предпочитают называть их «клетками-предшественниками», а не стволовыми клетками (Канунго М., 1982).
Необратимые постмитотические клетки — это конечные продукты дифференцировки. Они в высокой степени специализированы для выполнения определенных функций и не могут делиться. Таковы, например, нейроны, мышечные волокна и эритроциты. В них нет резерва частично дифференцированных стволовых клеток для замещения утраченных или поврежденных элементов, а оставшиеся зрелые клетки также не способны к делению (Фролькис В.В., 1988). Гибель клеток, которая наблюдалась после того, как органы полностью сформировались и стали функционировать, можно принять за признак старения данного органа, как например, в