Влияние транскрипционного фактора Dlx5 на онкотрансформацию T-лимфоцитов у трансгенных мышей, экспрессирующих активированную форму протеинкиназы Akt2

• Автор: Тимахов, Роман Анатольевич
• Шифр специальности: 03.01.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2012
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 108 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ СОКРАЩЕНИЙ
ВВЕДЕНИЕ
Е ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1Л. Киназа АКТ. История открытия
1.2. Строение АКТ
1.3. Активация АКТ и ее роль в передачи сигнала
1.3.1. Роль АКТ-киназы в контроле пролиферации
1.3.2.АКТ-киназы и выживаемость клеток
1.3.3. АКТ-киназы как регуляторы метаболизма
1.3.4. АКТ и клеточный рост
1.4. Процессы, происходящие при повреждении сигнального пути АКТ
1.5. in vivo модели активации АКТ
1.5.1. Активация АКТ в Т-клетках
2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1 Реактивы
2.2 Создание трансгенной линии мышей
2.3 Работа с культурами клеток
2.3.1. Культивирование клеток в жидких средах
2.3.2. Культивирование клеток в мягком агаре
2.4. Кариотипирование и FISH
2.5. Выделение ДНК
2.6. Выделение РНК
2.7. Нозерн-блоттинг
2.8. ПЦР

2.9. ОТ-ПЦР с детекцией в реальном времени
2.10. FACS/проточная сортировка клеток
2.11. Ретровирусная трансдукция лимфоцитов
2.12. РНК-интерференция
2.13. Сравнительная геномная гибридизация на микрочипах 29 (array CGH)
2.14. Вестерн-блоттинг
2.15. Подготовка лигандов и молекулярный докинг
3. РЕЗУЛЬТАТЫ
3.1. Создание линий трансгенных мышей LCKmyrAkt2, 32 спонтанно развивающих агрессивные Т-клеточные лимфомы
3.2. Детальный анализ транслокации t(14;15)
3.3.Детальный анализ inv(6)
3.4. Выявление потенциальных онкогенов на границах инверсии
3.5. Свойства Dlx5 как онкогена
3.6. Поиск низкомолекулярных ингибиторов Dlx5
4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
5. ЗАКЛЮЧЕНИЕ
6. ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ СОКРАЩЕНИЙ
БСА - бычий сывороточный альбумин,
ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота, кДНК - кодирующая ДНК, мРНК - матричная РНК,
ОТ-ПЦР - ПЦР после обратной транскрипции, п.н. - пары нуклеотидов,
ПЦР - полимеразная цепная реакции,
РНК - рибонуклеиновая кислота, рРНК - рибосомная РНК, т.п.н. - тысячи пар нуклеотидов,
Ig-подобный - иммуноглобулин-подобный,
FBS - fetal bovine serum (эмбриональная телячья сыворотка),
PBS - Phosphate buffer saline (фосфатно-солевой буфер),
PIN - prostate intraepitelial neoplasia (простатическая интраэпителиальная неоплазия), PIP3 - фосфатидилинозитол 3,4,5-трифосфат,
PIP2 - фосфатидилинозитол 4,5-дифосфат,
Runx2 - Runt-подобный транскрипционный фактор 2 (Runt-related transcription factor 2),
T-ALL - Т-клеточный острый лимфобластный лейкоз,
TBS - Tris buffer saline (трис-солевой буфер),
5'ТОР - 5' концевой олигопипримидиновый участок,
РКА - протеинкиназа А,
РКС - протеинкиназа С,
RAG - Специфичные для Т-лимфоцитов рекомбиназы, продукты генов, активирующих рекомбинацию (recombination activating genes — RAG)
RSS - сигнальная последовательность рекомбинации (recombination signal sequence), распознаваемая рекомбиназами RAG.

Days
Рис. 2. Кривые выживаемости Lck-MyrAkt2 трансгенных мышей линий 42, 55 и 72. Усреднены данные по 30 животным.каждой линии.