Особенности экспрессии генов в мозге крыс в условиях неполной глобальной ишемии под действием пептидов семакс и Pro-Gly-Pro

• Автор: Ставчанский, Василий Васильевич
• Шифр специальности: 03.01.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2012
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 146 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
ВВЕДЕНИЕ
Актуальность проблемы
Цель и задачи
Научная новизна
Практическая значимость работы
ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
Экспрессия генов и ее регуляция
Эпигенетическая регуляция. Модификации ДНК
Регуляция экспрессии генов на уровне транскрипции
Посттранскрипционная регуляция экспрессии мРНК
Проблемы изучения транскриптома
Реакция генома на ишемию
Особенности взаимодействия нейротрофических факторов и их рецепторов
Использование нейронептидов для нейропротекции. Семаке и PGP
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Модель неполной глобальной ишемии
Гистологическое исследование
Анализ экспрессии генов
Выделение тотальной РНК
Спектрофотометрическое определение количества РНК
Электрофоретическое разделение суммарной РНК в 1.5% агарозном геле в
денатурирующих условиях
Синтез одноцепочечной кДНК
Полимеразная цепная реакция. Электрофорез продуктов ПЦР В ПААГ
Полимеразная цепная реакция в реальном времени
Полуколичественный анализ уровня экспрессии генов методом ОТ-ПЦР и статистическая обработка результатов
РЕЗУЛЬТАТЫ
Гистологическое исследование
Изменения морфологии нервной ткани у крыс из контрольных групп после введения семакса и PGP

Изменения морфологии нервной ткани у крыс из экспериментальных групп
после введения семакса и PGP
Пролиферативная активность клеток головного мозга после введения пептидов
Анализ относительного содержания мРНК генов нейротрофинов и их рецепторов
Влияние неполной глобальной ишемии на экспрессию мРНК генов нейротрофинов Ngf, Bdnf, Nt-З и их рецепторов ТгкА, ТгкВ, ТгкС, р75 в
различных отделах головного мозга крыс
Влияние семакса на экспрессию мРНК генов нейротрофинов Ngf, Bdnf, Nt-З и их
рецепторов ТгкА, ТгкВ, ТгкС, р75 в различных отделах головного мозга крыс
Влияние PGP на экспрессию мРНК генов нейротрофинов Ngf, Bdnf, Nt-З и их
рецепторов ТгкА, ТгкВ, ТгкС, р75 в различных отделах головного мозга
Сравнение изменений экспрессии мРНК генов нейротрофинов и их рецепторов в эксперименте при введении семакса и PGP
Анализ экспрессии мРНК генов VegfA, Egrl, Cplx2 и Npylr у
экспериментальных животных
Анализ относительного содержания мРНК гена VegfA в лобной коре и
гиппокампе крыс
Анализ относительного содержания мРНК гена Egrl в лобной коре и
гиппокампе крыс
Анализ относительного содержания транскриптов мРНК гена Cplx2 (Cplx2_vl и
Cplx2_v2) в лобной коре и гиппокампе крыс
Анализ относительного содержания мРНК гена Npylr в лобной коре и гиппокампе крыс
ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
Модель «неполная глобальная ишемия головного мозга»
Гистологическое исследование головного мозга крыс
Экспрессия мРНК генов нейротрофинов и их рецепторов
Действие ишемии на экспрессию мРНК генов нейротрофинов и их рецепторов
Влияние семакса на экспрессию генов нейротрофинов и их рецепторов
Влияние PGP на экспрессию генов нейротрофинов и их рецепторов
Экспрессия мРНК генов VegfA, Egrl, Npylr и Cplx2
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
БЛАГОДАРНОСТИ
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
ATP - аденозинтрифосфорная кислота
BDNF (Brain-derived neurotrophic factor) - нейротрофический фактор мозга
CPLX2 (Complexin2) - комплексны
DEPC - диэтилпирокарбонат
dNTPs - дезоксирибонуклеозидтрифосфаты
Egrl (early growth response 1) - транскрипционный фактор, генов раннего ответа
GAPDH - глицеральдегид-3-фосфат-дегидрогеназа
HIF-1 (Hypoxia-inducible factor 1) - фактор индуцируемый при гипоксии
iNOS - индуцибельная NO-синтетаза
1Р3 - инозитол-1,4,5 - трифосфат
NGF (Nerve Growth Factor) - фактор роста нервов
NMDA - N - м ети л-D-асп артат
NOS - NO-синтетаза
Nt-3 (Neurotrophin 3) - нейротрофин
NPY1R (Neuropeptide Y receptor Yl) - рецептор Y1 нейропептида Y p75 - низкоафинный рецептор нейротрофинов
PCNA (Proliferating Cell Nuclear Antigen) - ядерный антиген пролиферирующих клеток
TEMED - N ,N, N ,N -тетраметилэтиленд и амин
TrkA (Tyrosine kinase receptor A) - тирозинкиназный рецептор, тип A
TrkB (Tyrosine kinase receptor В) - тирозинкиназный рецептор, тип В
TrkC (Tyrosine kinase receptor С) - тирозинкиназный рецептор, тип С
VEGF A (Vascular endothelial growth factor A) - фактор роста сосудистого
эндотелия А
АКТГ - адренокортикотропный гормон АПФ - ангиотензинпревращающий фермент

Выраженные нейропротекторные свойства нейротрофинов могут быть использованы при лечении различных неврологических заболеваний. Синтез и высвобождение нейротрофинов - это естественная реакция организма на повреждения клеток в нервной ткани, как например, в случае развития ишемических процессов. Однако существуют определенные проблемы при использовании экзогенных нейротрофинов (прежде всего речь идет о BDNF): например, размеры молекул не позволяют им проникать через гемато-энцефалический барьер. В связи с этим целесообразно использовать препараты, способные модулировать активность различных компонентов системы нейротрофинов и их рецепторов (Kim et al., 2005; Wu, 2005; Zhang 2008; Гусев, Скворцова, 2001).
Использование нейропептидов для нейропротекции. Семаке и PGP
Взаимное влияние друг на друга различных запускающих механизмов отдаленных последствий церебральной ишемии является теоретической основой для применения различных модуляторов, которые могут устранить локальные и системные нарушения в протекании молекулярно-биохимических реакций. Использование таких модуляторов, приводящее к защите мозговых клеточных структур от повреждения и гибели, в последнее время широко используется для патогенетической терапии ишемии мозга. Лечение
ишемического инсульта должно быть ранним и комбинированным. Кроме
нейропротекции оно включает в себя реперфузию (гемодилюция,
антикоагулянтная и антиагрегантная терапия - то есть те виды раннего фармакологического вмешательства, при которых улучшается микроциркуляция в ткани мозга), стимуляцию репаративных процессов, а также компоненты вторичной профилактики (предотвращение реэмболии, вторичного сосудистого и тканевого повреждения). Нейропротекторная терапия, в свою очередь, состоит из первичной нейропротекции, направленной на прерывание реакций глутамат-кальциевого каскада, являющихся основой эксайтотоксичности (сюда относят антагонистов потенциал-зависимых