Действие алкилирующих агентов и ионизирующей радиации на клетки человека с наследственными нарушениями репарации ДНК

• Автор: Спивак, Ирина Михайловна
• Шифр специальности: 03.00.25
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1998
• Место защиты: Санкт-Петербург
• Количество страниц: 278 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
Введение
Глава 1. Обзор литературы. Генетические заболевания
с первичными и вторичными дефектами репарации ДНК
1.1 .Эксцизионная репарация нуклеотидов
1.2.Пигментная ксеродерма
1.3.Трихотиодистрофия ЗО
1.4.Синдром Коккейна
1.5.Репарация двунитевых разрывов ДНК
1.6. Атаксия-телеангиэктазия
1.7.Анемия Фанкони
1.8.Синдром Блюма
1.9.Прогерии
1.9.1 .Синдром Вернера
1.9.2.Синдром Хатчинсона-Гилфорда
Глава 2. Материалы и методы
2.1 .Клеточные культуры
2.2.Получение диплоидных фибробластов
2.3 .Получение лимфобластоидных линий
2.4.Ведение клеток, их клонирование и изучение выжи- 105 ваемости
2.5. Получение липосом

2.6. Получение RecA-белка
2.7. Иммунологическое исследование RecA-белка
2.8. Метод щелочного раскручивания ДНК с последую- 107 щим разделением на колонках с гидроксилапатитом
2.9 Повреждающие воздействия на клетки
2.10. Статистическая обработка результатов
Глава 3. Результаты и обсуждение
3.1. Репарация ДНК в клеточных штаммах, полученных 112 от больных с различными наследственными заболеваниями после гамма-облучения и обработки алкилирую-
щими агентами прямого действия - эпоксидами (этиле-ноксидом, пропиленоксидом и эпихлорогидрином)
3.2. Участие рекомбиназ в процессах репарации после
гамма-облучения.
3.3. Роль конформационного сосотояния хроматина в
процессах репарации ДНК после гамма-облучения.
Выводы
Заключение
Литература

ВВЕДЕНИЕ
Изучение механизмов репарации ДНК представляет
несомненный интерес для клеточной биологии. Только нормальное функционирование этих репарирующих систем обеспечивает устойчивость клеток к облучению и действию химических агентов (Жестяников, 1979), стабилизирует генетический аппарат клетки при его нормальном функционировании - репликации и рекомбинации, то есть способствует поддержанию генетической стабильности клетки и обеспечению ее жизнедеятельности. Повреждения, возникшие в структуре ДНК и не подвергшиеся процессу репарации, неизбежно приводят к нарушению в других системах клетки, для которых ДНК служит источником и хранителем информации.
Одним из перспективных подходов к изучению репарационных процессов в ДНК является исследование мутантов с нарушениями тех или иных этапов репарации - процесса достаточно сложного и многообразного, к тому же неравномерно изученного. Если основные генетические механизмы эксцизионной репарации ДНК уже поняты (8апсаг, 1996), то процессы восстановления двунигевых разрывов и шире - репарации повреждений после гамма-облучения - остаются недостаточно ясными. Таким образом, изучение мутантов с нарушениями процессов репарации ДНК от повреждений после гамма-облучения, особенно у человека, открывает перспективы не только для расшифровки механизмов репарации ДНК в клетках человека, что является главной задачей этого исследования, но и помогает пониманию генетических основ канцерогенеза и старения. Это также важно для выяснения роли репарации ДНК в нормальной жизнедеятельности клетки.
Сейчас существует достаточно большое количество клеточных штаммов человека, для которых описана их повышенная

вышеизложенного можно предположить, что когда все полипептидные компоненты транскрипционного комплекса TFIIH будут подробно изучены и описаны, для всех них будет обнаружена двойная роль в клетке - участие как в транскрипции, так и в эксцизионной репарации нуклеотидов, а мутации в соответствующих им генах окажутся, вероятно, связаны с синдромами, включающими в различных комбинациях следующие клинические признаки: 1)дефект
эксцизионной репарации; 2)патологические изменения волос и ногтей; 3)патологические изменения кожи; 4)пониженный рост; 5)неврологические повреждения; 6)замедленное половое развитие; 7)проблемы с зубами. Различные комбинации этих симптомов описаны при заболеваниях, не относящихся к группе CS, TTD, BIDS. IBIDS и PIBIDS. Например, при синдроме Сегрена-Ларсона, синдроме, совмещающем ихтиоз с мужским гипогонадизмом (RUD), ихтиоз-щеки-брови (ICE) синдроме, окулотриходисплазии (OTD), кератоз-ихтиоз-глухота (KID) синдроме, синдроме Ротмунда-Томпсона и некоторых других (McCusick (е<±), 1992; Vermeulen et al., 1994b).
После обсуждения транскрипционной гипотезы хотелось бы кратко остановиться на связи TTD с раковыми заболеваниями. Хорошо известно, что все больные ХР, включая ХРВ и XPD группы, имеют выраженную предрасположенность к раку кожи (а также другим формам рака). С другой стороны, большинство, если не все больные фоточувствительной формой TTD имеют клеточный дефект эксцизионной репарации и повышенную частоту мутаций (Lehmann et al., 1988; Madzak et al., 1993) и при этом не предрасположены к раку кожи (Lehmann, 1982; 1987). Этот парадокс существенно поколебал основную идею о том, что дефект эксцизионной репарации нуклеотидов, повышенная мутабильность и предрасположенность к опухолям