Влияние некоторых экзогенных факторов на созревание ооцитов крупного рогатого скота IN VITRO

• Автор: Сметанина, Ирина Геннадьевна
• Шифр специальности: 03.00.23
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2001
• Место защиты: Боровск
• Количество страниц: 110 с.

СОДЕРЖАНИЕ

Введение
1. Обзор литературы
1.1. Изменения белкового спектра ооцитов млекопитающих в процессе созревания in vivo и in vitro
1.2. Жирнокислотный состав ооцитов животных и роль жирных кислот в процессах их созревания и развития
1.3. Влияние морфологического статуса яичника на созревание ооцитов крупного рогатого скота in vitro
1.4. Влияние сыворотки крови на созревание ооцитов и развитие эмбрионов крупного рогатого скота in vitro
1.5. Исследование роли циклического аденозинмонофосфата в процессах ядерного и цитоплазматического созревания ооцитов млекопитающих
2. Собственные исследования
2.1. Объекты и методы исследований
2.2.Результаты исследований и их обсуждение
2.2.1.Влияние экзогенных гормонов и фолликулярных клеток на белковый спектр созревших in vitro ооцитов крупного рогатого скота
2.2.2.Изменение жирнокислотного состава общих липидов ооцитов крупного рогатого скота в процессе созревания in vitro
2.2.3.Созревание ооцитов крупного рогатого скота in vitro из яичников различного морфофункционального состояния
2.2.4.Влияние сыворотки крови на созревание ооцитов и развитие эмбрионов крупного рогатого скота in vitro
2.2.5. Изучение возможности синхронизации ядерного и цитоплазмати веского созревания ооцитов крупного рогатого скота in vitro с использо ванием циклического аденозинмонофосфата
Заключение
Выводы
Практические предложения
Список литературы
ВВЕДЕНИЕ
Актуальность темы. В последние годы быстрыми темпами развиваются биотехнологические программы по получению трансгенных животных, клонированию, криоконсервации генетических ресурсов.
Для успешного осуществления вышеназванных программ необходимо иметь в наличии значительное количество полноценных зрелых яйцеклеток и зигот на ранних стадиях развития.
Учитывая то, что крупный рогатый скот относится к малоплодным видам животных, получить in vivo достаточное количество яйцеклеток и зигот не представляется возможным. Решить эту проблему возможно только с помощью созревания ооцитов и оплодотворения яйцеклеток крупного рогатого скота вне организма.
На созревание ядра и цитоплазмы ооцитов in vitro влияет множество экзогенных факторов, которые являются составляющими in vitro культуральной системы. Несмотря на обширные данные по вопросу созревания яйцеклеток крупного рогатого скота, многие моменты изучены недостаточно полно.
Установлено, что ооцигы, выделенные из фолликулярного окружения, in vitro вступают в спонтанный мейоз, но цитоплазма при этом может оставаться незрелой. Возможно, что такие ооциты могут быть даже нормально оплодотворены и разовьются в дальнейшем до преим-плантационных стадий. Но нет гарантий, что эти эмбрионы нормально приживутся и будет получено полноценное потомство. Если созревание ядра можно оценить как визуально (по наличию первого направительного тельца), так и с помощью приготовление классических суховоздушных препаратов, то подходы к проблеме изучения полноценности созревания цитоплазмы разработаны недостаточно.

цАМФ. Авторы полагают, что гипотетический фактор, который ингибирует созревание может поступать в ооцит двумя путями: либо через щелевые контакты между клетками гранулезы и ооцитами, либо путем прямого захвата ооцитом этого фактора, вырабатываемого клетками гранулезы, из фолликулярной жидкости.
Согласно рабочей модели 1 (рис.1) ингибирующий фактор генерируется в активной форме (отмечено звездочкой на рисунке ) посредством цАМФ-зависимого процесса в клетках гранулезы/кумулюса, прежде чем он попадает в ооциты через щелевые контакты, которые связывают ку-мулюсные клетки и ооцит. Относительно неактивная форма ингибитора находится в фолликулярной жидкости и поступает непосредственно в ооцит, где может быть активирована цАМФ-зависимым процессом. Активированный ингибирующий фактор напрямую действует на механизм созревания в ооците и этот эффект может модулироваться стероидными гормонами. Активная форма ингибитора может конвертироваться в неактивную форму в самом ооците, может происходить и реактивация посредством цАМФ-зависимого процесса, когда в ооците поддерживается достаточный уровень цАМФ. Когда уровень активированного ингибирующего фактора снижается до пороговой концентрации, возможно благодаря снижению в ооците уровня цАМФ и/или прекращения поступления его из гранулезных клеток, ооциты вступают в процесс созревания.
Согласно рабочей модели 2 (рис.1) ингибирующий фактор переносится из клеток гранулезы/кумулюса или поступает из фолликулярной жидкости и затем включается в поддержание уровня цАМФ в ооците. Поддержание мейотического блока зависит от цАМФ-зависимого процесса, который происходит только в ооците. Стероидные гормоны могут модулировать действие цАМФ на ооцит. В этой модели, фактор ингибирования, который образуется в клетках гранулезы/кумулюса, действует