Разработка иммуноферментной тест-системы для диагностики иерсиниоза крупного рогатого скота

• Автор: Астахова, Татьяна Станиславовна
• Шифр специальности: 03.00.23
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2002
• Место защиты: Щелково
• Количество страниц: 102 с. : ил

СОДЕРЖАНИЕ
ВВЕДЕНИЕ.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Используемые реактивы и материалы.

Определение активности конъюгатов в ИФЛ.

Постановка непрямою метода ИФА для дифференциальной

диагностики иерсиниоза и бруцеллеза.

Полиакриламидный гельэлсктрофорез ПААГЭ с додецил

сульфатом натрия ДСН

Иммуноблотанализ.
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.
1. Изучение антигенов клеток ii ii , ,
и
1.1 Анализ белковых профилей ДСНлизатов клеток после разделения в ААГ
1.2 Характеристика антигенов в методе иммуноблоттинга
2. Подбор оптимальных условий постановки ИФА для диагностики иерсиниоза.
2.1. Проверка различных сероваров иерсиний в качестве специфического антигена
2.2 Подбор оптимальной концентрации антигенов для сенсибилизации плашек.
2.3. Определение оптимального времени сенсибилизации иммунологических плашек антигенами.
2.4. Подбор оптимального значения буферной системы для сорбции антигенов и антител.
2.5. Подбор оптимального режима инкубации сывороток и конъюгатов
2.6. Влияние сроков хранения плашек, сенсибилизированных антигенами, на результаты ИФА.
2.7. Проверка чувствительности и специфичности разработанной ИФА тестсистемы
2.7.1. Исследование гетерологичных сывороток в предлагаемой ИФА тестсистеме
2.7.2. Исследование гипериммунных сывороток
2.7.3 Сравнение специфичности и чувствительности различных ИФА тестсистем для диагностики иерсиниоза
2.7.4 Исследование сывороток крови животных, полученных из хозяйств благополучных и неблагополучных по бруцеллезу.
ОБСУЖДЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ


Учитывая вышеизложенное, важное научное и практическое значение приобретают исследования, направленные на разработку высокочувствительных и эффективных методов дифференциальной диагностики иерсиниоза и бруцеллеза. В связи с вышеуказанными проблемами целью наших исследований явилась разработка тестсистемы иммунофермеитпого анализа ИФЛ для дифференциальной диагностики иерсиниоза и бруцеллеза крупного рогатого скота КРС. Охарактеризовать антигенную структуру иерсиний различных ссроваров и антигенные связи возбудителей иерсиниоза и бруцеллеза методами иммуноферментного, электрофоретического и иммуноблотного анализа. ИФА при исследовании гипериммунных антииерсиниозных и полевых сывороток крови животных. Методами электрофореза и иммуноблоттинга охарактеризован белковый состав клеток ii ii различных сероваров и и подтверждено, что и ii ii имеют несколько перекрестно реагирующих анттенных детерминант, выявляемых методом иммуноблоттинга. Установлено, что единственным дифференцирующим белком является белок бруцелл с молекулярной массой кД. Разработана тестсистема ИФА для диагностики исрсиниоза и дифференциальной диагностики иерсиниоза и бруцеллеза. Получены патент на изобретение Способ диагностики иерсиниоза 7 и патент на изобретение Способ диагностики бруцеллеза 5. ГIрактическая значимость. ТУ 0 на Набор для выявления антител к иерсиниям и бруцеллам в сыворотках крови крупного рогатого скота методом иммуноферментного анализа. Иерсиниоз острая бактериальная инфекция из группы зоонозов, характеризующаяся общей интоксикацией организма, частым развитием гастроэнтероколитов, полиморфизмом клинических проявлений, тенденцией к генерализации процесса с развитием поражений различных органов и систем, рецидивирующим и затяжным характером. Возбудителем кишечного иерсиниоза является ii ii, который в соответствии с i i относится к семейству i. Данный микроорганизм был впервые выделен и описан в году ii и , и как самостоятельный вид ii ii классифицирован в году после крупных вспышек эпизоотий в хозяйствах по разведению шиншилл в Европе и обнаружения этих бактерий у людей при клинических проявлениях аппендицита, гепатита, сепсиса , , , . Рядом исследователей установлено, что . Культуральные свойства . .ii относится к факультативным анаэробам, хорошо растет на обычных питательных средах МПА, агар Хоттингера, МПБ при 6. С. Отмечено, что клетки . С подвижны, при более высокой температуре культивирования С неподвижны. Характерной особенностью . При культивировании в режиме С изменяется характер роста в жидких и плотных питательных средах. Наряду с вышеописанными гладкими колониями на агаре можно наблюдать образование бугристых колоний формы непрозрачные, имеют неровный фестончатый край, поверхность может быть исчерчена, в бульоне выпадает осадок. При пересеве 57 пассажей форма реверсирует в форму. Как правило, при выделении из организма больного или из объекта внешней среды иерсинии находятся в форме , , , , . Представители вида . Из сообщений различных отечественных и зарубежных авторов, изучающих клинику, этиологию и патогенез иерсиниоза, следует, что инфекция встречается у многих видов диких и домашних животных рогатый скот, лошади, олени, кролики, зайцы, свиньи, птицы, морские свинки, кошки, собаки и др. От животных выделяют . По данным зарубежных авторов, основными носителями патогенных для человека сероваров . Большую роль в распространении иерсиниоза играют синантронные грызуны, особенно серые крысы. Многие исследователи сообщают о широком распространении иерсинии в окружающей среде. .ii выделяют от здоровых носителей среди теплокровных и холоднокровных животных, а также из различных резервуаров внешней среды вода, озера, овоши, а также продуктов животноводства. Однако большая часть штаммов, изолируемых из этих источников апатогенны.