Поиск и применение активного штамма-деструктора фенола и его хлорированных производных

• Автор: Кусова, Ирина Валерьевна
• Шифр специальности: 03.00.23
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2000
• Место защиты: Уфа
• Количество страниц: 112 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
ВВЕДЕНИЕ
ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ Микроорганизмы - деструкторы фенола и его хлорированных производных
1.1. Фенол и его хлорированные производные как загрязнители окружающей среды
1.2. Штаммы-деструкторы фенола и его хлорированных производных
1.3. Особенности процессов биологической деградации фенола
и его хлорированных производных
1.4. Генетические особенности бактерий-деструкторов фенола
и его хлорированных производных
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
2.1. Объекты исследований
2.1.1. Штамм Bacillus subtilis В-1742Д
2.1.2. Штаммы ВКМ
2.1.3. Штамм Escherihia coli НВ101
2.2. Получение чистой культуры штамма-деструктора 2,4-Д
2.3. Методы таксономических исследований
2.4. Рост культуры в жидкой питательной среде и его.учет
2.5. Определение устойчивости бактерий к антибиотикам
2.6. Определение количества 2,4-Д в культуральной жидкости
2.7. Идентификация продуктов метаболизма 2,4-Д
2.8 Биологическое тестирование культуральной жидкости
2.9. Получение препаратов геномной ДНК микроорганизмов
2.10. Получение препаратов плазмидной ДНК
2.11. Фракционирование препаратов плазмидной ДНК методом гель-фильтрации

2.12. Фракционирование препаратов ДНК в агарозном геле
2.13. Обработка препаратов плазмидной ДНК рестрикционными эндонуклеазами
2.14. Определение размеров фрагментов ДНК
2.15. Получение векторных молекул pBR322
2.16. Лигирование вектора pBR322 и фрагментов ДНК генома
штамма Bacillus subtilis В-1742Д
2.17. Клонирование фрагментов ДНК штамма
Bacillus subtilis В-1742Д
2.18. Тестирование рекомбинантных штаммов на селективных средах
2.19. Ферментативный гидролиз препаратов ДНК микроорганизмов, фракционирование и перенос на мембранный фильтр
2.20. Получение препарата радиоактивной ДНК
2.21. Гибридизация препаратов ДНК на фильтре
2.22. Статистический анализ результатов экспериментов
2.23. Физико-химические свойства и область применения
фенола и его хлорированных производных
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
3.1. Поиск штамма-деструктора
3.1.1. Исследование культурально-морфологических, физиологобиохимических и генетических признаков штамма-деструктора
3.1.2. Исследование процесса деградации 2,4-Д штамма
Bacillus subtilis В-1742Д
3.1.3. Биологическое тестирование культуральной жидкости
штамма Bacillus subtilis В-1742Д
3.1.4. Анализ субстратной специфичности штамма Bacillus subtilis В-1742Д в отношении фенола и его хлорированных производных
3.2. Использование штамма Bacillus subtilis В-1742Д для решения экологических проблем, связанных с обезвреживанием промышленных стоков химических и нефтехимических предприятий
3.2.1. Описание технологического процесса и технологической схемы очистных сооружений предприятий химического и нефтехимического профиля
3.2.2. Использование штамма-деструктора Bacillus subtilis В-1742Д для доочистки от фенолов сточных вод предприятий химического и нефтехимического профиля
3.3. Использование штамма Bacillus subtilis В-1742Д для решения проблем, связанных с поиском штаммов-деструкторов
3.3.1. Клонирование детерминант деградации 2,4-Д штамма
Bacillus subtilis В-1742Д
3.3.2. Культурально-морфологические, физиолого-биохимические и генетические признаки штамма E.coli pMKl6
3.3.3. Анализ структуры рекомбинантной плазмиды штамма
E.coliW, 101рМК16
3.3.4. Сравнительный анализ деградации 2,4-Д штаммов
E. coli HB 101 рМК 16 и Bacillus subtilis В-1742Д
3.3.5. Использование рекомбинантной плазмиды рМК16 в качестве зонда
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

Штамм Bacillus cereus И
Клетки диаметром больше 1 мкм, расположены одиночно, в парах, коротких цепочках. Споры овальные, локализованные цетрально и эксцентрально, спорангии не раздуваются. Колонии непрозрачные, мелкоскладчатые, беловатые. Окраска по Граму положительная.
Аэроб. В анаэробных условиях растет слабо. Хорошо растет при pH 6,8. Рост при pH 5,7 относительный. Реакция Вогес-Проскауэра положительная, рН<6. Образует кислоту из глюкозы, :газ из глюкозы не образует. Не образует кислоту из арабинозы, ксилозы и маннита. Использование цитрата относительное. Не использует пропионат, и' фенилаланин. Способен осуществлять гидролиз желатины, слабо гидролизует крахмал и казеин. Обладает каталазой и лецитиназой. Способен к редукции NO3. Штамм плохо растет в присутствии 2% NaCl, присутствии 5% NaCl и выше рост отсутствует. Растет в диапазоне температур от +22°С до +41° С, при температуре +4°С, +45°С и выше роста не наблюдается. Штамм устойчив к ампициллину, тетрациклину, не устойчив к хлорамфениколу, канамицину, стрептомицину.
Штамм Bacillus megaterium В
Подвижные цилиндрические палочки с закругленными концами, могут быть расположены одиночно, в парах, в коротких цепочках. Размер клеток колеблется по ширине в пределах 1,2-1,5 мкм, по длине - 2-5 мкм. Споры овальные, одиночные, располагаются центрально, спорангии не раздуваются. Окраска по Граму положительная.
Аэроб. В анаэробных условиях не растет. Хорошо растет при pH 6,8-7. Рост при pH 5,7 и выше 7 - слабый. Реакция Вогес-Проскауэра положительная, рН<6. Образует кислоту из арабинозы, ксилозы, маннита и глюкозы, газ из