Совершенствование технологии культивирования вируса для производства инактивированной вакцины против инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота

• Автор: Майджи, Ольга Владимировна
• Шифр специальности: 03.00.23
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1998
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 122 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ
1. ВВЕДЕНИЕ
2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.
2.1. Общие сведения об инфекционном ринотрахеите крупного
рогатого скота
2.2. Характеристика вируса.и его основные свойства
2.3. Профилактика инфекционного ринотрахеита
2.4.Методы крупномасштабного производства противовирусных препаратов
2.5. Заключение
3. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.
3.1. Материалы и методы
3.1 Л. Вирусы
3.1.2. Культуры клеток, питательные среды и растворы
3.1.3. Приготовление первично-трипсинизированных культур
клеток
3.1.4. Культивирование клеток перевиваемых линий
3.1.5. Криогенизация клеточных культур
3.1.6. Суспензионное культивирование клеток
3.1.7. Размножение клеток на микроносителях
3.1.8. Культивирование вируса ИРТ
3.1.9. Определение инфекционного титра вируса
ЗЛ.10. Подопытные животные
3.1.11. Реакция нейтрализации
3.1.12. Реизоляция вируса ИРТ
3.1.13 Электронно-микроскопические исследования

3.1.14. Статистическая обработка результатов
3.2. Результаты исследований
3.2.1. Выбор чувствительных культур клеток к вирусу ИРТ для крупномасштабного культивирования
3.2.1.1. Исследование перевиваемой линии клеток ПТ-80, как тест-культуры к вирусу ИРТ
3.2.1.2. Чувствительность первичных культур клеток и их субкультур к вирусу ИРТ
3.2.1.3. Чувствительность перевиваемых линий клеток к вирусу ИРТ
3.2.2. Изыскание оптимальных способов культивирования
вакцинного штамма вируса ИРТ
3.2.2.1. Размножение вируса инфекционного ринотрахеита
в суспензии клеток
3.2.2.2. Культивирование вируса ИРТ в перевиваемых линиях клеток ПТ-80 и МДВК на микроносителях
3.2.3. Изучение условий хранения вируса ИРТ для производства инактивированной вакцины
3.2.4. Исследование иммуногенности опытной серии инактивированной вакцины в опыте на телятах
4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
5. ВЫВОДЫ
6. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ
7. ЛИТЕРАТУРА
8. ПРИЛОЖЕНИЕ

ПЕРЕЧЕНЬ СОКРАЩЕННЫХ НАЗВАНИЙ
АТ - антитела
БОЕ - бляшкообразующая единица
BHV-1 - bovine herpes virus
ВИРТ - вирус инфекционного ринотрахеита
ВД - вирусная диарея
в/м - внутримышечно
ГЛА - гидролизат лактальбумина
Г - гуанин
ДМСО - диметилсульфоксид
ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота
и-РНК - информационная рибонуклеиновая кислота
ИН - индекс нейтрализации
и/н - интраназально
ИРТ - инфекционный ринотрахеит
КМК - крупномасштабное культивирование
кл - клетка
крс - крупный рогатый скот
МН - микроносители
ПГ-3 -парагрипп
PH - реакция нейтрализации
ТЦД - тканевая цитопатическая доза
ФБР - фосфатный буферный раствор
Ц - цитозин
ЭД - эффективная доза

3. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.
Работа выполнена в лаборатории противовирусных препаратов Всесоюзного научно-исследовательского и технологического института биологической промышленности, г.Щелково, согласно плану научно-исследовательских работ, и в отделе вирусологии, ВИЭВ.
3.1. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.
3.1.1. Вирусы.
В экспериментах использовали вакцинный штамм вируса ИРТ "ТК-А ВИЭВ", для контрольного заражения - эпизоотический штамм "Оренбург", полученные из ВГНКИ в 1980г. Вакцинный штамм "ТК-А ВИЭВ" получен в лаборатории вирусологии ВИЭВ из штамма "ТК" методом селективного отбора после многократного ультрафиолетового облучения вируссодержащей жидкости (Н.Н.Крюков и др., 1972).
3.1.2. Культуры клеток, питательные среды и растворы.
В исследованиях применяли первично-трипсинизированные культуры клеток почки эмбриона коровы (ПЭК), почки теленка (ПТ), тестикул бычков (ТБ), а также следующие перевиваемые линии клеток:
1. ПСГК - перевиваемая линия клеток почки сибирского козла, полученная из НИСХИ МСХ СССР;
2. СЭК - сублиния клеток селезенки эмбриона коровы, получена из ВИЭВ;
3. ТЭК - перевиваемая линия тимуса эмбриона коровы, ВИЭВ;
4. Ь-41 -.клон японской линии клеток 96, институт Гриппа, Ленинград;
5. ПМС - перевиваемая линия клеток почки морской свинки, ин-т Пастера, Ленинград;

6. МДСК - перевиваемая линия клеток почки собаки, УНИЭВ, г.Харьков, ВИЭВ.