Активность ферментов гликолиза в клетках и тканях при замораживании-отогреве

• Автор: Андриенко, Алла Николаевна
• Шифр специальности: 03.00.22
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1984
• Место защиты: Харьков
• Количество страниц: 122 c. : ил

Обзор литературы
1. Роль цитоплазматических ферментов в углеводно-фосфорном обмене
2. Действие низких температур на ферменты в составе клеток и тканей
Экспериментальная часть
3. Материалы и методы
4. Криочувствительность ферментов гликолиза в составе тканевых препаратов и клеток
при замораживании-отогреве
5. Элиминация ферментных белков в экзоцел-люлярную среду как показатель скрытых
"латентных” повреждений клеток при замораживании-отогреве
5.1. Значение клеток, сохранившихся после замораживания-отогрева, как источника внеклеточных ферментов
5.2. Гликолитическая активность гепатоцитов
после замораживания-отогрева
5.3. Активность гликолитических ферментов
в экзоцеллюлярной среде костного мозга в условиях криоконсервации

6. Влияние криопротекторов на элиминацию ферментов при замораживании-отогреве тканей и клеток
Заключение
Выводы
Список литературы

В настоящее время низкие температуры широко используются для сохранения клеток, органов и тканей в длительно жизнеспособном состоянии, что и обуславливает важное значение экспериментальных исследований по изучению механизма изменений, возникающих на молекулярном, субклеточном и клеточном уровнях в результате низкотемпературного воздействия. Первые шаги в криоконсервации биологического материала подтверждают оптимистические прогнозы применения этого метода для хранения и последующей трансплантации жизненноважных органов человека.
Однако, как известно /~44_7, прямой путь криоконсервации приводит к нежелательным явлениям, вызванным повреждениями биологического материала. Согласно современным представлениям, повреждающее действие низких температур на клетки и ткани обусловлено влиянием многочисленных факторов, возникающих при замораживании, на морфологическую и функциональную организацию живых систем С 64, 159, 2047. Большинство исследований, выполненных как на животных, так и растительных клетках, свидетельствуют, что точка приложения повреждающих факторов локализуется на уровне белковых молекул и мул! тиэнзимных комплексов, связанных с различными мембранными образованиями.
Причем, степень повреждения ферментных белков, как показано /357, зависит от исходной молекулярной структуры фермента, а также его физико-химического микроокружения в составе клетки или модельной системы. В настоящее время известно, что из многих ферментов наиболее чувствительными к действию низких температур в составе бесклеточной системы оказываются энзимы, имеющие олигомерную четвертичную структуру /Г92_7. Установлено также /Г4»26,31,1837, что ферменты и ферментные комплексы, ассоциированные е различными мембранными системами, также изменяют свои каталитические свойства

Таблица
Активность цитоплазматических ферментов после быстрого замораживания до -19б°С - быстрого отогрева гомогената, полученного из клеток печени крысы и надосадочной фракции из гомогената
Фермента : Гомогенат из клеток : : печени : Надосадочная фракция из гомогената
: До замора-: живания : контроль : После : :заморажи- : : вания : До замораживания контроль : После за- гмораживания • •
Гексокиназа 4,40+0,40 3,49+0,32 Р >0,1 1,26+0,06 1,42+0,15 р >0,1 '
Глюкозо-6-фос- фатдегидрогеназа 30,14+2,64 34,27+3,03 р >0,1 7,94+0,80 6,37+0,54 Р >0,1
Фосфорилаза 7,49+0,70 9,14+1,03 р >0,1 2,75+0,23 3,11+0,39 Р > 0,1
Лактатдегидро- геназа 14,80+0,41 15,43+1,22 р >0,1 16,87+1,57 21,15+1,99 Р > 0,1
Фосфофруктоки- наза 11,03+1,15 12,98+1,04 Р > 0,1 4,32+0,31 4,67+0,29 Р >0,1
Примечание: Активность ферментов выражена в мкг ШДФ-Н, для лактатдегидрогеназы в мкг НАД-Н за I мин инкубации при 37°С в расчете на 10® разрушенных гепатоцитов, содержащихся в I мм^ клеточной суспензии; количество опытов - 7.
Методической особенностью этих опытов, в отличие от описанных выше, являлось то, что гомогената тканей готовились в среде замораживания, без предварительного ее отделения от срезов. Таким образом, определялась в конечном счете суммарная ферментативная активность изучавшихся тканей. Как показывают результата, представленные в таблицах 4,5,6, общая активность всех ферментов в ткане-