Адаптивный ответ в клетках человека с различной способностью репарировать повреждения ДНК

• Автор: Каминская, Инесса Алексеевна
• Шифр специальности: 03.00.15
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1999
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 100 с. : ил.

Оглавление
Содержание Страницы
Список сокращений
Актуальность работы
Цели и задачи исследования
Научная новизна
Научно-практическое значение работы
Обзор литературы
Общие понятия об адаптивном ответе
Гипотезы о механизмах адаптивного ответа в клетках человека
Перекрестный адаптивный ответ в клетках человека
Адаптивный ответ в репарационно -дефектных клетках человека
Адаптивный ответ в лимфоцитах людей, проживающих в регионах с повышенным фоном радиации, в результате аварии на
ЧАЭС
Экспериментальная часть
Глава 1. Материалы и методы
2.1. Объекты исследования
2.1.1. Культура лимфоцитов периферической крови человека
2.1.2. Перевиваемые культуры клеток
2.1.3. Культура куриных фибробластов
2.2. Мутагены и их действие
2.3. Методы исследования
2.3.1. Определение возникновения одно-нитевых разрывов ДНК
2.3.1.1. Получение клеточных лизатов
2.3.1.2. Хроматография клеточных лизатов

2.3.2. Реактивация и индуцированный мутагенез вируса осповакцины

Глава 2. Адаптивный ответ в репарационно
дефектных клетках человека
а) Пигментная ксеродерма
б) Г омоцистинурия
Заключение
Глава 3. Радиоадаптивный ответ (РАО) в лимфоцитах детей, проживающих на территории с повышенным фоном радиации
а) РАО в лимфоцитах детей, проживающих на загрязненной территории, в зависимости
от плотности загрязнения
б) Сравнение РАО у детей с умственной отсталостью, проживающих на контрольных территориях и территориях с повышенным фоном радиации
Заключение
Глава 4. АО при воздействии хлорида кадмия
в клетках человека
Сравнение АО при использовании в
качестве адаптирующих факторов
- радиации и хлорида кадмия
Заключение
Обсуждение результатов
Выводы
Список литературы

Список сокращений
АО- адаптивный ответ
АТ- атаксия телеангиэктазия
ГАП- гидроксиапатит
ГЦН- гомоцистинурия
ГР- фЭЙ
имг- Институт медицинской генетики
К3- коэффициент защиты
ммс- метилметансульфонат
мнм- мелилнитрозомочевина
4-НХО- 4-нитрохинолин - 1 - оксид
нг- Н-метил-И-нитро-И-нитрозогуанидин
ПК (Хр)- пигментная ксеродерма
РАО- радиоадаптивный ответ
СХО- сестринские хроматидные обмены
ФГА- фитогемагглютинин
ХА- хромосомные аберрации
ЧАЭС- Чернобыльская атомная электростанция

Гранулированный гидроксиапатит (ГАП) для колоночной хроматографии готовили по методу, разработанному Мазиным и Сулимовой (Магш е1:.а1., 1974).
2.3.Методы исследования
2.3 .1 Определение возникновения однонитевых разрывов
ДНК.
Для регистрации возникающих под действием мутагенов разрывов ДНК использовали методику, разработанную Ридбергом (ЧубЬе ,1975) с некоторыми модификациями (Засухина, Барашнев, Васильева и др.,1982).
Суть метода состоит в том, что в условиях щелочного лизиса клеток ДНК начинает “расплетаться” с точек разрывов.
Фиксируя это положение путем мгновенной нейтрализации и, затем, дробя молекулы ДНК ультразвуком, получаем набор дву- и однонитевых фрагментов ДНК, которые разделяли с помощью хроматографии на ГАП. О числе разрывов, возникающих в ДНК под действием мутагенов и степени их восстановления, судили по снижению доли двунитевой ДНК по сравнению с контролем.
Чем меньше степень повреждения, тем меньше разрывов ДНК, тем большее количество ДНК элюируется с колонки. В качестве контроля использовали клетки, не обработанные мутагенами.
Т.к. количество спонтанных разрывов ДНК различно для каждого типа клеток, то каждый опыт рассчитывали относительно своего контроля.