Молекулярно-генетический анализ хромосомной сар-области vibrio cholerae 0139

• Автор: Щелканова, Елена Юрьевна
• Шифр специальности: 03.00.07
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1998
• Место защиты: Саратов
• Количество страниц: 139 с.

ОГЛАВЛЕНИЕ

іті —" цш
ВВЕДЕНИЕ
ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
ГЛАВА 1. 0139-АНТИГЕН И ПОЛИСАХАРИДНАЯ КАПСУЛА - НОВЫЕ ПО-
ВЕРХНОСТНЫЕ АНТИГЕНЫ V.СНОЕЕНАЕ 0139
1.1. 0139-антиген; структура и функция
1.2. Капсульный полисахарид У.сЬоІегае 0139 и его роль.
в вирулентности и иммуногеннооти
1.3. Генетический контроль оиосинтеза полисахаридной капсулы
ГЛАВА 2. УМЕРЕННЫЕ ФАГИ У.СНОЬЕЕАЕ 0139 И ИХ РОЛЬ В ИЗМЕНЧИВОСТИ ВИРУЛЕНТНЫХ СВОЙСТВ
СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
ГЛАВА 3. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
3.1. Бактериальные штаммы
3.2. Питательные среды и реактивы
3.3. Методы
3.3.1. Получение мутантов с помощью индуцированного мутагенеза и определение их питательных потребностей
3.3.2. Конъюгационные скрещивания
3.3.3. Определение чувствительности культур к холерным
фагам
Определение продукции майново- чувствительных
Гі Л
3.3.6. Приготовление лизата трансдуцирующего фага
3.3.7. Трансдукционные скрещивания
3.3.8. Электронно-микроскопический анализ холерных вибрионов
3.3.9. Выделение фаговой ДНК
3.3.10. Рестрикционный анализ
3.3.11. ДНК-ДНК гибридизация на нитроцеддшюзных фильтрах пс Е.Southern
3.3.13. Электрофоретический анализ
ГЛАВА 4. ГЕНЕТИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ САР-ОБЛАСТИ V.CH0LERAE 0139
4.1. Генетическое картирование гена cap с помощью конъ-югационных скрещиваний
4.2. определение оцепленнооти гена cap с генами, контролирующими подвижность холерных вибрионов и биосинтез маннозо-чувствительных гемагглютинирующих пилей адгезии
4.3. Определение локализации на хромосоме умеренного фага
ГЛАВА 5. ИЗУЧЕНИЕ СВОЙСТВ И РОЛИ УМЕРЕННОГО ФАГА 139 В НАРУШЕНИИ СИНТЕЗА КАПСУЛЬНОГО ПОЛИСАХАРИДА
Выделение фаговой ДНК и ее рестрикционным анализ
F, 9ж
мах V. cholera© 0139
Роль фага 139 в фенотипической изменчивости V.cholera© 0139
Трансдуцирующие свойства умеренного фага
Я '1
D.i. определение присутствия фага 139 в различных штам-
О * г—1 х
ГЛАВА 6. ИЗУЧЕНИЕ РАСПРОСТРАНЕННОСТИ УМЕРЕННОГО ФАГА 139 СРЕДИ РАЗЛИЧНЫХ ШТАММОВ V.CHOLERAE 01- И НЕ 01-СЕ РОГРУІШ НА ОСНОВЕ ДНК-ДНК ГИБРИДИЗАЦИИ ПО E.SOU
THERN
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
его одницепичечнан. ДНК упаковывается в нитевидные частицы оакте риофага, которые секретируются в культуральную среду (Campos J. et al., 1998). При этом в супернатанте штаммов V.cholerae, несущих СТХФ в репликативной форме, может содержаться значительное количество фаговых частиц (10°/мл). Совсем недавно было обнаружено, что в репликации фага СТХФ, возможно, участвует криптичес-кая плазмида piL.0 размерим 4, 7 т.п.н., которая может встраиваться в хромосому холерных вибрионов в непосредственной близости от места локализации фага СТХФ (Rubin E.J. et al., 1998). Следует
особо отметить тот факт, что фаг СТХФ способен переносить, или трансдуцировать, гены вирулентности, поскольку заражение этим фагом нелизогенных нетоксигенных штаммов холерного вибриона приводит к образованию клонов, получивших вою кассету вирулентности, входящую в состав СТХ-генетического элемента. Таким образом, нитевидный фаг СТХФ может обеспечивать новый механизм горизонтального переноса генов у возбудителя холеры.
В 1998 г. был обнаружен еще один нитевидный фаг, обозначенный как фаг 493, поскольку он был выделен из штамма V.cholerae 0139 оерогруппы AJ27-493 (Jouravleva Е.А., McDonald S.A., 1998). Подобно другим филаментозным фагам в электронном микроскопе он представляет собой нитевидные частицы шириной £,6 нм и различной длины. Две нити на одном конце некоторых фаговых частиц напоминают фимбрии нефиламентозных фагов. Фаговый геном представлен в виде 9,3 т.п.н. закрытой кольцевой одноцепочечной молекулы ДНК, в состав которой входит двунитевой ствол размером 0,4 т.п.н., поддерживающий однонитевую петлю размером в 2 т.п.н. (Jouravleva 1998).
Фаг 493 умеренно термоотабилен (при 75иС инактивируется),