Стандартизация методов изготовления сухой вирусвакцины против трансмиссивного гастроэнтерита свиней на основе глубинного культивирования вирусов

• Автор: Шкабура, Юрий Петрович
• Шифр специальности: 03.00.06
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1999
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 209 с.

СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМЫХ СОКРАЩЕНИЙ ТГЭ - трансмиссивный гастроэнтерит ТЭ - тканевые эксплантаты ЭЛИС - эксплантаты легких плодов свиней ЭКПС - эксплантаты кишечника плодов свиней Д - доза заражения КЖ - культуральная жидкость ЭВМ - электронновычислительная машина КМ -культуральная модель ПС - питательная среда СК - сыворотка крови ГЛА - гидролизат лактальбумина
ГЛАХ - гидролизат лактальбумина на растворе Хенкса ГЛАЭ - гидролизат лактальбумина на растворе Эрла ОМ - обезжиренное молоко
СЖФ - сахарозо-желатиновая среда в фосфатном буфер
К - константа скорости инактивации
ЗС - защитная среда (стабилизатор)
п/о - пероральная иммунизация
в/м - внутримышечная иммунизация
и/н - интраназальная иммунизация
НД - нормативная документация
ИП - индекс пролиферации
УК - урожай клеток
НТД - нормативно-техническая документация
ПЛК - перевиваемая линия клеток
ЦПД - цитопатогенное действие
ЦПЭ - цитопатогенный эффект
ПП - почка поросенка
ПЭС - почка эмбриона свиньи
ТП - тестикулы поросят
ЩС - щитовидная железа свиньи
СЖС - слюнная железа свиньи
КС - кишечник свиньи
ПК - почка крольчонка
ПЩ - почка щенка
КЭ - куриные эмбрионы

СОДЕРЖАНИЕ
1 . ВВЕДЕНИЕ
2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
2.1. Трансмиссивный гастроэнтерит свиней (историческая
справка і
2.2. Характеристика возбудителя ТГЭ свиней
2.3. Культуральные свойства вируса ТГЭ свиней
2.4. Использование суспензий переживающих тканей в вирусологической практике
2.5. Особенности патогенеза и иммунитета у животных при ТТЭ
свиней
2.6. Средства и методы специфической профилактики ТГЭ свиней
3. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
3.1. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИИ
3.2 Сравнительная оценка чувствительности культуральных моделей к вирусу ТГЭ свиней
3.3. Влияние некоторых Факторов на накопление вируса ТГЭ свиней
в суспензии переживающих тканей
3.4. Определение оптимальных параметров глубинного культвирова-ния вируса ТГЭ свиней с использованием математических методов планирования и анализа многофакторного эксперимента
3.5. Усовершенствование технологической линии для глубинного
культивирования вируса
3.6. Оптимизация технологических параметров культивирования
вируса ТГЭ свиней в суспензии переживающих тканей

3.6.1. Способ культивирования
3.6.2. Системы и условия перемешивания
3.6.3. Интенсивность аэрации и pH среды
3.6.4. Степень заполнения
3.6.5. Объем реактора
3. 6 . 6 . Двухстадийное культивирование вируса
3.7. Усовершенствование метода изготовления питательных сред
3.8. Совершенствование технологии крупномасштабного культивирования вируса ТГЭ свиней
' 3.9. Подбор стабилизатора и режима лиофилизации вирусвакцины
3.10. Промышленное производство антигена и зирусвакцины против ТГЭ свиней
3.11. Стабильность вирусвакцины против ТГЭ свиней в процессе длительного хранения
3.12. Эффективность вирусвакцины сухой культуральной против ТГЭ свиней в эксперименте и ветеринаркой практике
3.13. Технико-экономическое обоснование производства вирусвакцины против тгэ свиней на основе глубинного культивирования вируса
4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
5. ВЫВОДЫ
6. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ
7. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
8. ПРИЛОЖЕНИЯ

ность метода минимум в 2 раза без дополнительных затрат на приобретение доноров ткани. Вирусы "пневмоэнтеритов" КРС, за исключением ПГ-3 и PC-вируса, не требуют предварительной адаптации штаммов к суспензии ТЭ и не изменяют биологических свойств в течение 10-кратного пассирования. В реакторах объемом 5 и 30 л были получены вирусы ИРТ и ПГ-3 в титре соответственно 9,0-9,5 ТЦД50/мл и 6,5-7,0 1§ТЦД5 о/и л и ГА в титре 7,0-7,5 log2. Антигены характеризовались выраженными иммуногенными свойствами в составе вакцины Бивак {ТУ 46-20-1470-84) и после 2-кратного применения индуцировали у телят синтез антител к штамму MBA 1/80 ИРТ в титре 2,4-
3,2 log2 и антигемагглютининов к штамму MBA 1/70 вируса ПГ-3 в титре 10,0-12,0 1 og2.В производственных условиях вакцина была эффективной и предотвращала заболевание КРС ИРТ и ПГ-3 (72).
Исследованиями В.С.Иванова и сотрудников (55) показана возможность культивирования производственного штамма "ТК-ВИЭВ" вируса ИРТ КРС в суспензии ТЭ почки эмбриона коров в роллерных аппаратах. Выявлено, что состав питательных сред не оказывает заметного влияния на накопление вируса. Максимум инфекционности на уровне 6,0-6,5 1gTUflsо/ил отмечали через 27-30 ч культивирования.
Анализ данных литературы свидетельствует о необходимости для каждого вида переживающих тканей строго соблюдать определенную технологию и условия культивирования, обеспечивающие, максимальные сроки переживания клеток ТЭ. Показано также, что накопление вирусов в суспензии ТЭ существенным образом зависит от метода и условий культивирования, состава питательных сред, вида и степени измельчения тканей, предварительной адсорбции вируса клетками ТЭ, интенсивности перемешивания и аэрации и целого ряда других факторов. Кроме того следует отметить, что представленные в литературе