Идентификация вируса болезни Марека методом полимеразной цепной реакции

• Автор: Полехин, Сергей Владимирович
• Шифр специальности: 03.00.06
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2002
• Место защиты: Владимир
• Количество страниц: 136 с. : ил

ОГЛАВЛЕНИЕ

1. ВВЕДЕНИЕ.

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

2.1. Общая характеристика болезни Марека.

2.2. Классификация возбудителя.

2.3. Морфологические особенности вируса болезни Марека.

2.4. Репликация вируса болезни Марека

2.5. Антиг енная вариабельность вируса болезни Марека

2.6. Свойства некоторых белков, кодируемых ДНК вируса

болезни Марека

2.7. Диагностика болезни Марека

2.8. Заключение по обзору литературы.
3. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
3.1. Материалы.
3.2. Методы
4. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ
ОБСУЖДЕНИЕ.
4.1. Индикация генома и серотипирование вируса БМ методом ПЦР.
4.1.1. Выбор метода выделения ДНК вируса болезни Марека
и суммарной ДНК из различных вируссодержащих материалов
4.1.2. Исследование профиля вариабельности гена тимидинкиназы вируса болезни Марека и теоретический
рассчет праймеров для серотипирования вируса.
4.1.3. Дифференциация вируса болезни Марека ссротипов 1 и 3 с помощью амплификации вариабельного фрагмента гена тимидинкиназы методом ПЦР
4.1.4. Исследование профиля вариабельности гена вируса болезни Марека и теоретический рассчет праймеров для
индикации генома и серотипирования вируса БМ.
4.1.5. Индикация генома и серогипирование вируса болезни Марека с помощью амплификации вариабельного фрагмента гена методом ПЦР.
4.2. Секвенирование и сравнительный анализ первичных структур вариабельных областей генов В и пшидинкиназы изолятов вируса БМ, выделенных на птицефабриках России и
стран СНГ в гг
4.3. Определение возможности дифференциации онкогепных и неонкогенных штаммов вируса БМ серотипа 1 мет одом ПЦР с праймерами, ограничивающими область инвертированных повторов генома длиной 2 п.н
4.4. Анализ первичной структуры гена рр штаммов вируса БМ серотипа 1 для оценки возможности проведения дифференциации вакцинных н патогенных штаммов
4.5. Теоретический расчет праймеров, ограничивающих фрагмент гена рр, для дифференциации вакцинных и патогенных штаммов вируса БМ серотипа 1 методом прямого нуклеотидного секвенпрования
4.6. Амплификация ДНК фрагмента гена рр вируса БМ серотипа 1 методом ПЦР
4.7. Секвенирование амплифицированного фрагмента гена рр
вируса БМ серотипа 1
4.8. Определение и сравнительный анализ первичной структуры амплифицированного фрагмента гена рр изолятов вируса БМ серотипа 1, выделенных на птицефабриках России и стран СНГ
в гг
5. ЗАКЛЮЧЕНИЕ
6. ВЫВОДЫ.
7. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ
8. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ.
9. ПРИЛОЖЕНИЯ .
1. ВВЕДЕНИЕ
Актуальность


Метод дифференциации вакцинных и патогенных штаммов вируса БМ серотипа 1, основанный на определении точечных мутаций в амплифицированном фрагменте гена рр и сравнительном анализе с опубликованными последовательностями других штаммов. Сравнительный анализ первичных структур фрагментов гена рр полевых изолятов вируса БМ серотипа 1, а также отечествешплх и зарубежных вакцинных и патогенных штаммов. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 2Л. Болезнь Марека высококонтагиозное, неопластическое, злокачественное, лимфопролиферативное, инфекционное вирусное заболевание птиц отряда куриных, проявляющееся образованием лимфоидных опухолей и процессами демиелинизации нервных тканей. Заболевание было впервые описано в г. Жозефом Мареком, профессором Королевского венгерского университета 9. Широкое разнообразие клинических признаков и патологических изменений вначале привело к неясности терминологии . Воспалительный характер некоторых повреждений периферических нервов подсказал Мареку идентифицировать болезнь как полиневрит. Синонимы, применяемые впоследствии, включают неврит, нейролимфоматоз куриных, и ряд параличей. Моноядерная инфильтрация радужной оболочки, которая вызывает изменения от депигментации до серого помутнения, является основой для таких названий заболевания, как слепота, сероглазие, ирит, увеит, и глазной лимфоматоз. Лейкоцитарные изменения в различных висцеральных органах часто относят к висцеральным лимфоматозам, и на коже как кожный лейкоз. В г. Всемирной ветеринарной ассоциации птицеводства i предложил использовать термин болезнь Марека для распознавания этиологически различных лимфопролиферативных и невропатических заболеваний. Этот термин используется и в настоящее время. Эта инфекция распространена повсеместно и является серьезной проблемой почти во всех странах мира 5, в том числе и в нашей стране. Заболевание под названием нейролимфоматоз птиц впервые зарегистрировано в России в годы, о чем сообщалось в работе Коронного Сборник работ Воронежской областной опытной станции по ветеринарии, . Вспышки болезни Марека с высокой смертностью и преобладанием висцеральных лимфом наблюдались по крайней мере с г. США и вызывала у молодых цыплят ярко выраженные висцеральные поражения. Возникшую в е годы тяжелую ситуацию по болезни Марека в США, Англин и Европе охарактеризовали как эпизоотию. В это время было предложено название острая форма болезни Марека в противоположность форме с доминирующими нервными изменениями, которая затем была обозначена как классическая форма болезни Марека. Острую форму Болезни Марека в СССР впервые установили в Г. Классическая форма болезни Марека характеризуется поражением периферической и центральной нервной системы и проявляется хромотой, атаксией, парезами, параличами крыльев, шеи и хвоста , . У больной птицы могут измениться цвет радужной оболочки глаз, форма и размер зрачка, в результате чего может наступить частичная или полная слепота. Вольная птица погибает в 3 5 месячном возрасте. В возрасте от 5 до месяцев при этой форме болезни при отсутствии падежа и исхудания у кур отмечают иридоциклиты. При вскрытии трупов находят диффузно очаговые утолщения нервных стволов и изменение их цвета. Острое течение болезни раньше рассматривалось как острый лейкоз. При этой форме поражается птица в возрасте от 4 до недель . В хозяйстве обычно болезнь проявляется внезапно, протекает быстро, клинически проявляется массовыми траизиторными параличами. Через недель наблюдается сильное увеличение падежа в результате поражений внутренних органов лимфоидными опухолями. Остро болезнь протекает преимущественно у птиц до половозрелого возраста, однако она приводит и к значительному снижению яйценоскости у взрослой птицы. У птиц, павших при остром течении болезни, обнаруживают опухоли во внутренних органах гонадах, печени, легких, селезенке, почках, бурее и тимусе, коже, мышцах, находят изменения в центральной и периферической нервной системе. Патологогистологические изменения характеризуются лимфоидноклеточной инфильтрацией пораженных органов и тканей.