Первичная структура генов фибера и гексона аденовирусов птиц и разработка новых методов диагностики аденовирусной инфекции

• Автор: Лобанов, Владислав Анатольевич
• Шифр специальности: 03.00.06
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1999
• Место защиты: Владимир
• Количество страниц: 139 с. : ил.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
а.о. - аминокислотный остаток
ГТЦ - гуанидинтиоцианат
ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота
ДСБ - ДНК-связывающий белок
ДСН - додецилсульфат натрия
ИКП - инвертированные концевые повторы
ИПТГ - изопропилтио-р-О-галактопиранозид
ИФА - иммуноферментный анализ
кДНК - ДНК-копия с РНК-матрицы
КРС - крупный рогатый скот
КЭ - куриный эмбрион
мРНК - матричная РНК
н.о. - нуклеотидное основание
ОП - основание пентона
ОРТ - открытая рамка трансляции
ПААГ - полиакриламидный гель
п.н. - пар нуклеотидов
ПЦР - полимеразная цепная реакция
ПЭГ - полиэтиленгликоль
РДП - реакция диффузной преципитации
РИФ - реакция иммунофлюоресценции
PH - реакция нейтрализации
РНК - рибонуклеиновая кислота
РСК - реакция связывания комплемента
РТГА - реакция торможения тем агглютинации
СГПК - синдром гидроперикардита кур
ТБ - терминальный белок
Трис - Трис (гидроксиметил) аминометан
ХАО - хорио-аллантоисная оболочка
ЦПИ - цитопатические изменения
ЭДТА - этилендиаминтетрауксусная кислота
ЭИД50 - доза вируса, вызывающая гибель 50% инфицированных эмбрионов
BAV - bovine adenovirus - аденовирус КРС
CAV - chicken anemia virus - вирус анемии кур
CELO - chick embrio lethal orphan - аденовирус птиц FAY1
EDS-76 - egg drop syndrome virus - вирус синдрома снижения яйценоскости
(ССЯ-76)
FAV - fowl adenovirus - аденовирус птиц
HAV - human adenovirus - аденовирус человека
НЕ - hemorrhagic enteritis - геморрагический энтерит
Ну - гидрофобный аминокислотный остаток
HYR - hyper-variable region - высоко-вариабельная область
MAV - murine adenovirus - аденовирус мышей
MSD - marble spleen disease - болезнь мраморной селезенки
dNTP - дезоксирибонуклеотидтрифосфат
OAV - ovine adenovirus - аденовирус овец
QBV - quail bronchitis virus - вирус бронхита перепелов
SPF - specific pathogen free - свободный от специфических патогенов
YA-PHK - virus-associated - ассоциированная с вирусом РНК
Vp - вирусный белок (Virus protein)
X - любой аминокислотный остаток
ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ
1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1. Аденовирусы как этиологические агенты некоторых заболеваний
птиц
1.2. Классификация аденовирусов
1.3. Структурная организация аденовирусов птиц
1.3.1. Строение вириона
1.3.2. Структурная организация аденовирусного генома
1.3.3. Сравнительный анализ геномов аденовирусов птиц
и млекопитающих
1.4. Структура фибера и его значение в патогенезе аденовирусной
инфекции
1.5. Структура и функции белка гексона
1.6. Репликация аденовирусной ДНК
1.7. Лабораторная диагностика аденовирусов птиц
1.7.1. Выделение и культивирование аденовирусов птиц
1.7.2. Серологические и молекулярно-биологические методы, используемые для лабораторной диагностики
аденовирусов птиц
2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Материалы
2.2. Методы
2.3. Результаты собственных исследований
2.3.1. Разработка метода выявления генома вируса Е08-76 в различных пробах с использованием ПЦР и секвенирования амплифицированных фрагментов гена фибера
2.3.1.1. Выявление локализации в геноме вируса ЕВБ-76 и определение нуклеотидной последовательности
гена, кодирующего полипептид фибера
2.3.1.2. Анализ нуклеотидной последовательности гена и предсказанной аминокислотной последовательности

Такая характерная часть генома, как VA-РНК, также имеет у аденовирусов птиц резкие отличия. Все до настоящего времени выявленные VA-РНК аденовирусов млекопитающих имеют длину 150-170 н
транскрибируются но r-цепи и локализованы ближе к левому концу генома [138]. В противоположность этому VA-PHK FAV1 короче (91 н.),
локализована в правом конце генома и транскрибируется по 1-цепи. Несмотря на то, что VA-РНК вируса EDS-76 локализована сходно с VA-PHK FAV1, она транскрибируется по r-цепи подобно VA-PHK аденовирусов млекопитающих [104].
1.4. Структура фибера и его значение в патогенезе аденовирусной инфекции
Аденовирусы птиц являются удобной моделью для изучения вирулентности аденовирусов. Во-первых, доступно множество изолятов FAY8, выделенных во время вспышек ІВН и варьирующих в патогенности от высоковирулентных, которые убивают птиц в дозах меньших, чем 1/2 TCIDso (инфекционная доза для органной культуры) на птицу, до непатогенных. Во-вторых, в отличии от аденовирусов человека, вирулентность которых тестируется на моделях животных, что часто приводит к затруднениям в экстраполяции результатов, естественный хозяин аденовирусов птиц доступен для подобных экспериментов.
Ету и соавт. [76] показали, что после того, как тремя штаммами аденовирусов птиц группы FAY заразили 3-недельных цыплят, два более вирулентных штамма были выделены из почек, бурс, миндалин слепых отростков и печени, тогда как менее вирулентный штамм выделили только из миндалин слепых отростков.
Способность разных штаммов аденовирусов птиц репродуцироваться в разных клетках определена белком фибера. В экспериментах по ингибированию прикрепления аденовирусов человека к специфическим рецепторам, расположенным на поверхности клеток HeLa, с помощью очищенного полипептида С-концевого домена фибера показано, что С-концевой домен фибера содержит антигенную детерминанту, ответственную за прикрепление вируса к специфическим рецепторам клетки [136, 103, 50]. Pallister и соавт. [170] показали, что именно фибер ответственен за отличия в