Разработка новых экспериментальных систем для оценки анти-ВИЧ-активности препаратов на клеточных и тканевых моделях

• Автор: Киселева, Яна Юрьевна
• Шифр специальности: 03.00.06
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2005
• Место защиты: Кольцово
• Количество страниц: 128 с. : 13 ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
Введение

Глава 1. Обзор литературы

1.1. Патогенез ВИЧинфекциии в лимфоидной ткани

1.2. Препараты, используемые для лечения ВИЧинфекции

1.3. Развитие устойчивости к нуклеозидным ингибиторам обратной

транскрип тазы

Глава 2. Материалы и методы

Глава 3. Результаты

3.1. Получение мутантов ВИЧ1, резистентных к нуклеозидным ингибиторам обратной гранскриптазы. Изучение их фенотипических и генотипических свойств
3.2. Исследование перекрестной устойчивости мутантов ВИЧ1 к различным нуклеозидным ингибиторам обратной транскриптазы в культуре клеток
3.3. Подавление различных штаммов ВИЧ1 новыми мембрзнотропными соединениями в культуре клеток МТ4 и первичной культуре мононуклеарных клеток периферической крови
3.4. Исследование антиВИЧ активности НзИОТ и других перспективных антиретровирусных препаратов в культуре лимфоидной ткани человека
3.5. Разработка экспериментальной системы для оценки постинтеграционных ингибиторов вирусной репликации
Глава 4. Обсуждение
Выводы
Список используемых сокращений
Список литературы


В ряде работ показано возрастание уровня ВИЧспсцифичсских цитотоксических 8 Глимфоцитов в острой фазе ВИЧиифекции , 0, 2. Эти клетки, как полагают, несут основную ответственность за снижение виремии 7. ВИЧсиецифические цитотоксические СТлимфоциты непосредственно взаимодействуют с инфицированными клетками и вызывают их лизис 0, кроме того, они секретируют рхсмокины , макрофагальные воспалительные белки II, I1 р, которые блокируют корецептор 5 на поверхности лимфоцитов и моноцитов, препятствуя их заражению , 8. Параллельно клеточному иммунному ответу в лимфоидной ткани идет формирование гуморального иммунного ответа. Активированные 4 Т лимфоциты взаимодействуют с циркулирующими специфическими Вклетками па границе Т и В зон лимфоидной ткани и стимулируют их пролиферацию. Активированные Вклетки лимфобласты затем мигрируют в первичные лимфоидные фолликулы, где они быстро пролиферируют, формируя герминативные центры. Герминативные центры это место соматических гипермутаций и селекции высокоаффиниых Вклеток в окружении сети фолликулярных дендритных клеток. Антитела к вирусу обычно появляются в течение 2 недель практически у всех в течение 8 недель после начала острой лихорадочной фазы 7, 7. Сначала в сыворотке ВИЧинфицированных появляются антитела, которые связываются со структурными белками р, р и их предшественником полипротеином р . Появление антител к белку р сопровождается снижением концентрации свободного антигена р в сыворотке. Эти антитела не препятствуют заражению клеток i vi 0, 8. ВИЧ , , и , обнаруживаются позднее уже после снижения концентрации вируса в крови . В этот же период появляются антитела к белкам, кодируемым геном рЗ 1. Иногда также обнаруживают антитела к низкомолекулярным регуляторным белкам, кодируемым вирусными генами v, v, vi, v, и . Поскольку нейтрализующие антитела появляются в период, когда виремия уже спадает, считается, что гуморальный ответ не играет центральную роль в контроле репликации ВИЧ1 на ранней стадии ВИЧинфекции 0, 8, 5. ПолагаЕОТ, что нейтрализующие антитела ответственны за быстрое удаление вирусных частиц из циркуляции в конце острой лихорадочной фазы и во время последующей бессимптомной фазы ВИЧинфекции. Во время бессимптомной фазы ВИЧинфекции происходит активная репликация и накопление вируса в лимфоидной ткани, в то время как в моионуклеарных клетках периферической крови репликация вируса либо отсутствует, либо слабая . Вирусные частицы, окруженные нейтрализующими антителами и комплементом, по данным многочисленных наблюдений , 8, 2, 3, 1, захватываются фолликулярными дендритными клетками зародышевых центров лимфоидной ткани, посредством взаимодействия с рецепторами СЗ компонента комплемента и фрагмента I на поверхности этих клеток 2. При гистологическом исследовании лимфоузлов видны скопления вирусов на выростах клеточной мембраны фолликулярных дендритных клеток зародышевых центров и в паракортикалыюй зоне 4, при этом в герминативных центрах имеются единичные лимфоциты, цитоплазма которых содержит вирусную РНК. Считается, что фолликулярные дендритные клетки нс поддерживают репликацию ВИЧ , 0, 8. Они выполняют свою обычную функцию при формировании иммунного ответа удерживают антиген и представляют его иммуннокомпстентными клеткам 4, тем самым, обеспечивая высокую концентрацию инфекционных вирусных частиц 5 в лимфоидной ткани. Однако депонирование ВИЧ приводит к длительной активации клеток и синтезу провоспалительных цитокииов ИЛ1 Р, ФНОа и ИЛ6. Эти цитокины, в свою очередь, вызывают активацию зараженных лимфоцитов и, таким образом, запускают репродукцию ВИЧ. Следствием является хроническая стимуляция иммуиокомпетептных клеток и постоянное заражение 4 клеток 1, мигрирующих в зародышевые центры для взаимодействия с Влимфоцитами и участия в развитии нормального гуморального ответа против ВИЧ и других патогенов. Как показано . ВИЧинфекции лимфоузлы i содержать большое число зараженных 4 клеток в парафолликулярной зоне, в основном в латентной стадии инфекции.