Биологические свойства возбудителя калицивирусной инфекции кошек и разработка метода диагностики болезни

• Автор: Крылов, Алексей Николаевич
• Шифр специальности: 03.00.06
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2000
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 115 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМЫХ СОКРАЩЕНИЙ
ВВЕДЕНИЕ
1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1. Распространение, патогенез, клинические признаки
и патологические изменения при калицивирусной инфекции кошек
1.2. Систематика, морфология, антигенная структура калицивирусной инфекции кошек
1.3. Устойчивость вируса к физико-химическим воздейст
виям
1.4. Культуральные свойства калицивируса
1.5. Патогенность вируса для естественно-восприимчивых и лабораторных животных
1.6. Диагностика калицивирусной инфекции кошек
1.7. Получение гипериммунных сывороток для серологических реакций
1.8. Лечение калицивирусной инфекции
1.9. Профилактика калицивирусной инфекции
1.10. Заключение
СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
2. Материалы и методы
3. Результаты исследований
3.1.Изучение эпизоотологии и диагностики респираторных болезней кошек
3.2.Выделение и идентификация изолятов калицивируса от спонтанно больных кошек
3.3.Изучение патогенных свойств штамма «Ларе» возбудителя калицивирусной инфекции для лабораторных и естественновосприимчивых животных
3.4.Изучение методов культивирования калицивируса кошек
в культуре клеток
3.5. Электронно-микроскопические исследования калицивируса
3.6. Подбор защитных сред для лиофильного высушивания возбудителя калицивируса кошек
3.7.Серологические реакции
3.7.1. Реакция нейтрализации в культуре клеток для определения уровня антител к калицивирусной инфекции кошек
3.7.2. Разработка РИГА для ретроспективной диагностики калицивирусной инфекции кошек
3.7.3. Формалинизация эритроцитов
3.7.4. Танизация эритроцитов
3.7.5 .Сенсибилизация эритроцитов
3.7.6. Контроль эритроцитарного диагностикума на отсутствие инфекционного вируса
3.7.7. Сравнительное изучение активности и специфичности (нативных и формалинизированных) сенсибилизированных эритроцитарного диагностикума
3.7.8. Использование различных консервантов и их влияние на длительность хранения эритроцитов
3.7.9.Определение активности и специфичности эритроцитарного диагностикума
3.7.10. Испытание РИГА для диагностики калицивирусной инфекции у экспериментально зараженных животных
3.7.11. Испытание РИГА для серологической диагностики калицивирусной инфекции кошек в « полевых » сыворотках кошек
3.7.12. Испытание РИГА для определения имунного статуса иммунизированных животных к калицивирусной инфекции кошек
ОБСУЖДЕНИЕ
ВЫВОДЫ
ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

Список используемых сокращений
FCV - feline calieivirus ( кошачий калицивирус )
FVR(FHV) - feline rhinotracheitis virus( вирус кошачьего ринот-рахеита ( герпесвирус)
FRV - feline reovirus (кошачий реовирус)
FIV - feline immunodifecit virus ( вирус кошачьего иммуноди-фецита)
CRFK - перевиваемая линия клеток почки кошки Fc3Tg - перевиваемая линия клеток языка кошки
KF - перевиваемая линия клеток селезенки кошки РНГА - реакция непрямой гемагглютинации
PH - реакция нейтрализации
ИФА - иммуноферментный анализ
РСК - реакция
тцд- тканевая цитопатическая доза
ЦПД - цитопатогенное действие
ЗФР - забуференный физиологический раствор

контролем. При внутримышечном заражении вводили 1 мл вируса в область бедренной мышцы. При интраназальном заражении предварительно слегка скарифицировали иглой слизистую оболочку носа и вводили из шприца 1мл вируса. На 3; 7; 14, 21, 28-е сутки от котят брали смывы из носовой и ротовой полости. Пробы смывов брали стерильными ватными тампонами, смоченными в ЗФР (pH 7,2), которые вводили на глубину 0,5 см в каждую ноздрю котенка, глоточный же смыв брали с задней стенки глотки. Тампоны помещали в стерильные флаконы, содержащие 50% гидролизата лактоальбумина с 50% средой Игла ( pH 7,3-7,5 ) и антибиотики: 100 Ед пенициллина ( гентамицина 10 мкг/мл ), 100 мг/л стрептомицина и 100 Ед фунгизона на 1мл среды.
Тампоны с экссудатом выдерживали во флаконах при температуре 2-10°С в течение 30 мин, периодически встряхивая. Затем тампоны отжимали и извлекали из флаконов, а жидкостью заражали пробирочную субкультуру клеток почки котенка. Материал вносили в объеме 0,1 мл. Пробирки с субкультурой клеток выдерживали 1час при 37°С , после чего в пробирки заливали по 0,9 мл поддерживающей среды, не содержащей сыворотку крови крупного рогатого скота.
Инфицированные пробирки выдерживали при 37°С 1-Зсут. Пробирки, в которых проявлялось цитопатическое действие ( ЦПД ), замораживали при -20°С и хранили при этой температуре до следующего пассажа в культуре клеток.
Кроме того у котят брали кровь из бедренной вены на 7, 14, 21, 30 и 60 день.