Особенности пространственной организации и межмолекулярных взаимодействий гистонов в растворе и в составе хроматина

• Автор: Протас, Александр Федорович
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1984
• Место защиты: Киев
• Количество страниц: 125 c. : ил

I. ВВЕДЕНИЕ
II. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
ГЛАВА I. ОСОБЕННОСТИ ПЕРВИЧНОЙ СТРУКТУРЫ И ФУНКЦИИ ГИСТОНОВ
1.1. Особенности первичной структуры ГИСТОНОВ
1.2. Функции гистонов
ГЛАВА 2. ВЗАИМОДЕЙСТВИЕ ГИСТОНОВ
2.1. Взаимодействие коровых гистонов и структура
продуктов их ассоциации
2.2. Взаимодействие олигомеров коровых гистонов с ДНК
2.3. Структура и взаимодействие гистона Н1
ГЛАВА 3. СБОРКА НУКЛЕОСОМ ПРИ РЕПЛИКАЦИИ ХРОМАТИНА
III. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ПАСТЬ
ГЛАВА 4. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
4.1. Материалы
4.2. Методы
4.2.1. Выделение ядер и хроматина из тимуса теленка
4.2.2. Выделение хроматина из семенников и
сперматозоидов карпа
4.2.3. Выделение суммарных гистонов, гистона Н1
и смеси Кировых гистонов
4.2.4. Выделение нативных олигомеров гистонов: октамера /НЗ-Н4-Н2А-Н2В/2, тетрамера /НЗ-Н4/2 и димера /Н2А-Н2В
4.2.5. Реконструкция олигомеров гистонов
4.2.6. Обработка трипсином хроматина, олигомеров гистонов и выделение трипсинустойчивой части тетрамера /НЗ-Н4/2, димера /Н2А-Н2В/ и гистона Н1

4.2.7. Определение молекулярной массы гистонов
и их олигомеров методом гель-фильтрации
4.2.8. Электрофорез гистонов
4.2.9. Спектральные метода анализа
4.2.10. Обработка гистонов п-ХМБ
4.2.11. Фосфорилирование гистонов протеинкиназой
4.2.12. Статистическая обработка результатов
ІУ. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
ГЛАВА 5. СТРУКТУРА И ВЗАИМОДЕЙСТВИЕ ГИСТОНОВ НІ
ГЛАВА 6. ВЬЩЕЛЕНИЕ И ХАРАКТЕРИСТИКА НАТИВНЫХ
ОЛИГОМЕРОВ ГИСТОНОВ: ОКТАМЕРА /НЗ-Н4-Н2А-Н2В/2, ТЕТРАМЕРА /НЗ-Н4/2 И ДИЛЕРА /Н2А-Н2В
ГЛАВА 7. СРАВНИТЕЛЬНЫЙ АНАЛИЗ ПРОСТРАНСТВЕННОЙ ОРГАНИЗАЦИИ И СУБФРАКЦЙОИНОГО СОСТАВА ОКТАМЕРОВ ГИСТОНОВ /НЗ-Н4-Н2А-Н2В/2 ИЗ СЕМЕННИКОВ И СПЕРМАТОЗОИДОВ КАРПА
ГЛАВА 8. ЭТАПЫ СБОРКИ ОКТАМЕРА ГИСТОНОВ В МОДЕЛЬНЫХ УСЛОВИЯХ. ПРОМЕЖУТОЧНЫЕ СТРУКТУРНЫЕ СОСТОЯНИЯ
8.1. Реконструкция олигомеров гистонов. Структурные состояния гистонов в 0 - 0,1 М *ГаС1
8.2. Структурные состояния тетрамера /НЗ-Н4/2 и
димера /Н2А-Н2В/ в диапазоне 0,1 - 1,2 М ХаСІ
873. Изменения в структуре тетрамера и димера
при их ассоциации в октамер
ГЛАВА 9. СТРУКТУРА ГИСТОНОВ В СОСТАВЕ ХРОМАТИНА
С РАЗЛИЧНЫМ УРОВНЕМ КОМПАКТНОСТИ
- 4 -

V. ЗАКЛЮЧЕНИЕ
VI. ВЫВОДЫ
УН. ЛИТЕРАТУРА

сутствии соли и ,96 кДа при ^50 мМ ХаС1/ следует рассматривать как результат взаимодействия гистонов Н1 с образованием димера. Выявленная способность гистона Н1 к формированию димера несомненно коррелирует с наличием вторичной и третичной структуры. Видимо, даже небольшой структурированности при низкой ионной силе /в области участка 41-117//200/ достаточно для специфической ассоциации двух молекул гистонов Н1. Из рис.2 следует, что в том случае, если концентрацию соли увеличивали добавляя аликвоты концентрированного раствора А/аС1^ каких либо изменений в светорассеянии препарата не происходит. В то же время, если концентрацию^аС1 увеличивать, добавляя порции твердой соли, наблюдается интенсивная агрегация гистона Н1 - происходит увеличение оптического поглощения препаратом при 320 нм. Полученные данные, таким образом, свидетельствуют о способности гистона Н1 к эффективным, но возможно невысокоспецифическим взаимодействиям. Это прямо коррелирует с наличием упорядоченной вторичной и третичной структуры в его составе. Чем можно объяснить действие кристаллов твердой соли на способность гистона к агрегации? Видимо, неупорядоченные концевые участки гистона Н1 некоторым образом формируют своеобразную катионную оболочку вокруг глобулярной части1. Именно она и препятствует образованию высокомолекулярных агрегатов - гистон способен образовывать только димер:;
При добавлении твердой соли происходит локальное повышение ее концентрации до бесконечности /на поверхности кристалла/, что вызывает разрушение указанной оболочки. При этом концевые участки молекул гистонов некоторое время электростатически взаимодействуют с кристаллами соли /вернее с ионами С1/ и, таким образом, уже не препятствуют взаимодействию глобулярных участков. К тому времени, когда локальная концентрация ЯаС1 уменьшится, гистон успевает сформировать агрегаты, которые затем уже не разрушаются. Возможно, аналогия-