Фосфорилирование РНК-связывающих белков ооцитов рыб и амфибий

• Автор: Кандрор, Константин Вилленович
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1984
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 189 c. : ил

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
А. ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ КОМПОНЕНТОВ ТРАНСЛЯЦИОННОГО АППАРАТА
И РЕГУЛЯЦИЯ БИОСИНТЕЗА БЕЛКА В ЭУКАРИОТИЧЕСКИХ КЛЕТКАХ
1. ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ ФАКТОРА ИНИЦИАЦИИ elF
1.1. Ингибитор трансляции, появляющийся в лизатах ретикулоцитов при недостатке гемина
1.2. Ингибитор трансляции, появляющийся в лизатах ретикулоцитов при добавлении двуспиральной РНК
1.3. HCI и dai - две разные протеинкиназы с одинаковой
. специфичностью по отношению К еIF-2 оо
1.4* Каким образом фосфорилирование eIF-2oo приводит
к остановке трансляции в лизатах ретикулоцитов?
1.5. Дефосфоршгарование eiF-2oc
1.6. Фосфорилирование eIF-2y3
1.7. Фосфорилирование других факторов инициации
2. ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ РИБ0С0МН0Г0 БЕЛКА S6
2.1. Что приводит к изменению степени фосфорилирования S6?
2.2. Как фосфорилирование S6 может.быть связано с активацией трансляции?
3. ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ АМИНОАЦИЛ-тРНК-СИНТЕТАЗ
Б. ВЗАИМНЫЙ ОШЕН СВОБОДНЫХ РНК-СВЯЗЫВАЮЩИХ И
ИНФОМОСОМНЫХ БЕЛКОВ - ВЕРОЯТНЫЙ МЕХАНИЗМ РЕГУЛЯЦИИ
ЭКСПРЕССИИ мРНК
I. НЕКОТОРЫЕ БЕЛКИ ИНФ0Ш0С0М ПРИСУТСТВИЯ
В ЦИТОПЛАЗМЕ В СВОБОДНОМ СОСТОЯНИИ

2. СВОВОЛНЫЕ ЦИТОПЛАЗМАТИЧЕСКИЕ И ПОЛИСОМО СВЯЗАННЫЕ ИНФОМОСОМЫ СОДЕРЖАТ РАЗНЫЙ НАБОР БЕЛКОВ
3. СВОБОДНЫЕ ЦИТОПЛАЗМАТИЧЕСКИЕ ИНФОМОСОМЫ СОДЕРЖАТ РЕПРЕССОР ТРАНСЛЯЦИИ, ОТСУТСТВУЮЩИ В ПОЛИСОМО СВЯЗАННЫХ ИНФОШОСОМАХ
4. ФОСФОРИЛИРОВАНИЕ БЕЛКОВ ИНФОМОСОМ
5. цАМФ-НЕЗАВИСИМЫЕ ПРОТЕИНКИНАЗЫ -.ФЕРМЕНТЫ,
ФОСФОРИЛИРУЮЩИЕ БЕЛКИ ИНФОМОСОМ
5.1. Цитоплазматические казеиновые киназы
5.2. Ядерные казеиновые киназы
5.3. Возможные субстраты казеиновых киназ
5.4. Гистоновые киназы
5.5. Протеинкиназы, ассоциированные с микросомами
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
1. Буферные растворы
2. Получение ооцитов рыб и аифибий
3. Гомогенизация ооцитов и получение безрибосомного экстракта
4. Иммобилизация поли(У) на сефарозе
5. Выделение РНК-связывающих. белков из. безрибосомных
. экстрактов ооцитов
6. Выделение РНК-связывающей протеинкиназы
7. Дефосфоршшрование казеина
8. Определение протеинкиназной активности
9. Получение препаративных количеств [32Р]казеина
10. Получение [14С]рРНК
11. Определение РНК-связывающей активности

12. Мечение протеинкиназы радиоактивным иодом
13. Инъекция меченой протеинкиназы в ооциты
14. Солянокислый гидролиз фосфорилированных белков
15. Высоковольтный электрофорез на бумаге
16. Определение содержания белка в пробах
17. Электрофорез в пластине полиакриламидного геля
в присутствии додецилсульфата натрия
18. Авторадиография высушенных гелей и бумажных электрофореграмм
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
I. Выделение РНК-связывающих белков, обнаружение в их составе эндогенной протеинкиназной активности и
определение оптимальных условий протекания реакции
2. РНК-связывающие белки не содержат активных форм фосфатаз и протеаз
3. Идентификация РНК-связывающей протеинкиназы
4. Выделение РНК-связывающей протеинкиназы
5. Радиоактивное мечение РНК-связывающей протеинкиназы, инъекция ее в ооциты и анализ распределения метки
в сахарозном градиенте
6. Влияние фосфорилирования РНК-связывающих белков эндогенной протеинкиназой на их РНК-связывающую,,,. активность
7. Изменение активности РНК-связывающей протеинкиназы при созревании ооцитов Acipenser stellatus Pall. J23
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

формированных белков, либо с их дефосфорилированием. Однако указания на присутствие в составе мРНП(из ядер клеток неЬа) фосфатазы получены лишь в одной работе (243). Удивительно то, что этими не авторами в том же году было опубликовано сообщение (41), в котором отрицается существование фосфатазной активности информосомных белков из ядер НеЬа . Не исключено, правда, что для проявления фосфатазной активности нужно понижение pH до 7,4 (243), в то время как при pH 8-8,5 (41) фосфатаза теряет активность. Тем не менее в обзоре Эгли и соавт. указывается на отсутствие фосфатазной активности в белках мРНП (86).
Карделли и Пито сообщают о стимуляции протеинкиназной активности, обнаруженной ими в полисомосвязанных информосомах, в клетках гепатомы, по сравнению с обычными печеночными клетками (48). Возможно, что повышение активности этого фермента каким-то образом связано с изменением трансляции при раковой трансформации.
Во всяком случае, учитывая важность реакций фосфорилирова-ния - дефосфорилирования в регуляции многих клеточных процессов (188,250), исследование биологической роли фосфорилирования информосомных белков представляется актуальной задачей. Примечательно, что большинство субстратов из числа компонентов белок-синтезирующего аппарата, в том числе и белки информосом, фосфо-рилируются с АМР-независимыми протеинкиназами. В настоящее время накоплено много данных, касающихся содержания в тканях, внутриклеточной локализации и субстратной специфичности этих ферментов. На основании полученных результатов сейчас складывается классификация сАМР-независимых протеинкиназ. Рассмотрению этих вопросов посвящена следующая глава.