Структурно-функциональные свойства высокомолекулярного комплекса аминоацил-тРНК-синтетаз из печени крыс в условиях острого лучевого поражения

• Автор: Слепцова, Инна Леонидовна
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1984
• Место защиты: Киев
• Количество страниц: 164 c. : ил

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
ОЕЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
Глава I. ВЫСОКОМОЛЕКУЛЯРНЫЕ МУЛЪЖФЕШЕНТНЫЕ КОМПЛЕКСЫ АМИНОАЦИЛ-тРЕЖ-СИНТЕТАЗ В КЛЕТКАХ ВЫСШИХ ОРГАНИЗМОВ
1.1. Характеристика ашноадил-тРЖ-с инте т аз ных комплексов
1.2. Структурная организация и состав кошлексов аминоацил-тРНК-синтетаз
Глава 2. АКТИВНОСТЬ АМИНОАІЩ-тРНК-СИНТЕТАЗ ПРИ ДЕЙСТВИИ ИОНИЗИРУЮЩЕЙ РАДИАЦИИ
ЭКСПЕРИгЖНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
Глава 3. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
3.1.Выделение высокомолекулярных кошлексов амино-ацил-тРНК-синтетаз из печени крыс
3.2. Выделение и очистка, лизил-тРНК-синтетазы
из печени крыс
3.3. Аналитический электрофорез высокомолекулярных кошлексов аминоацил-тРНК-синтетаз
3.4. Определение константы седиментации высокомолекулярного комплекса ашноацил-тРНК-синтетаз
3.5. Выделение суммарного препарата тРНК из печени крыс
3.6. Определение активности аминоацил-тРНК-синтетаз в составе высокомолекулярного комплекса
3.7. Определение аістивности метил трансфераз высокомолекулярного комплекса ашноавдл-тРНК-синтетаз
3.8. Определение АДР—риб о зилирующей способности высокомолекулярного комплекса аминоацил-тРНК-синте-таз
3.9. Определение включения Д-рибозы / % / в высокомолекулярный комплекс аминоацил-тРНК-синтетаз
3.10. Определение активности ацетилтрансфераз
3.11. Определение включения уксусной кислоты / ^С / в высокомолекулярный комплекс аминоацил-тРНК-синтетаз
3.12. Определение активности протеинкиназ высокомолекулярных комплексов аминоацил-тРНК-синтетаз
3.13. Определение активности фосфопротеидфосфатазы высокомолекулярного комплекса аминоацил-тРНК-синтетаз
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
Глава 4. ФИЗЖО-ШШЕСШЕ СВОЙСТВА ВЫСОКОМОЖОТЯРНОГО КОМПЛЕКСА АМИНОАЩЩ-тРНК-СИНТЕТАЗ ИЗ ПЕЧЕНИ ИНТАКТНЫХ И ОБЛУЧЕННЫХ КРЫС
Глава 5. ОСНОВНЫЕ ЭНЗИМОЛОГИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ АМИНО-АЦЙЛ-тРНК-СИНТЕТАЗНОГО КОМПЛЖСА ИЗ ПЕЧЕНИ КРЫС
В УСЛОВИЯХ ОСТРОГО ЛУЧЕВОГО ПОРАЖЕНИЯ
Глава 6. ФЕРМЕНТЫ ПОСТТРАНСЛЯЦИОННЫХ МОДИФИКАЦИЙ БЕЖОВ
В СОСТАВЕ ВЫСОКОМОЛЕКУЛЯРНОГО КОМПЛЕКСА АРСаз В . НОРМЕ И ПРИ ЛУЧЕВОМ ПОРАЖЕНИИ
6.1. Протеинкиназа
6.2. Фосфопротеидфосфатаза

6.3. Метилтрансфераза
6.4. Поли-ДЦР-риб о зилтрансфераза
6.5. Ацетилтрансфераза
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
ЛИТЕРАТУРА

сахарозой. Соотношение объемов среды к весу печени - 2:1. Гомогенизировали на холоду в гомогенизаторе Поттера. Ядра убирали низкоскоростным центрифугированием - 48000 с^в течение 15 мин, митохондрии - центрифугированием при 70000 <^30 мин. Пленку жира удаляли фильтрацией супернатанта через 4 слоя марли. Получали полупрозрачный супернатант. К нему добавляли 5 мл 25%-ного раствора додецилсульфата натрия в воде, перемешивали и выдерживали в водяной бане при 60°0 5-Ю мин. Раствор становился прозрачным. В бане предварительно прогревали суспензию ітаСІО^ в этаноле (перхлорат натрия растворяется неполностью) . Лизат с додецилсульфатом натрия выливали в суспензию в этанол и перемешивали до полного растворения перхлората натрия. Смесь охлаждали до +10°С и выдерживали при этой температуре 30 мин. Супернатант отбрасывали. Осадок гомогенизировали в гомогенизаторе Поттера в 2 М растворе їїаСІ при 60°С в течение 5 минут. Суспензию охлаждали и выдерживали на холоде в течение часа, затем центрифугировали при 20000 о 20 мин. тРНК осаждали из супернатанта 2,5 объемами этанола, осадок собирали центрифугированием при 48000 ^ в течение 20 мин и перерастворяли в 4 мл буфера А, содержащего 0,15 М їїаСІ. Раствор осветляли центрифугированием при 20000 о в течение 10 минут.
Для окончательной очистки раствор обессоливали гель-фильтрацией на колонке биогеля Р-4, уравновешенного тем же буфером. Скорость элюции 30 мл/час. тРНК выходит в объеме 9 мл. Затем ее фракционировали на колонке с ДЭАЭ-целлюлозой, уравновешенной буфером А, содержащим 0,15 М їїаСІ. После внесения препарата элюцию проводили тем же буфером до исчезновения поглощения при 260 нм. Элюант ступенчато замещали на 0,35 М NаС1