Иммуногенные свойства гликопротеина NSI и других белков вируса клещевого энцефалита

• Автор: Матвеева, Вера Александровна
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2000
• Место защиты: Новосибирск
• Количество страниц: 134 с. : ил.

Оглавление
Введение.

Глава I. Молекулярногенетическая характеристика флавивирусов обзор литературы.

1.1.1. Морфология вирионов.

1.1.2. Молекулярная организация генома.

1.1.3. Процессинг полипротеинапредшественника.

1.1.4. Свойства флавивирусных белков.

1.2. Структура и свойства гликопротеина Е флавивирусов.

1.3. Первый неструктурный белок 1 флавивирусов.

Глава II. Экспериментальная часть Материалы и Методы.

2.1. Материалы, реактивы, буферные растворы.

2.2. Методы исследования.
Глава 1. Результаты и обсуждение.
3.1. Иммуног енность белков ВКЭ для людей.
3.1.1. Гуморальный иммунный ответ в сыворотках крови
больных клещевым энцефалитом.
3.1.2. Определение специфических антител к белкам ВКЭ в спинномозговых жидкостях больных клещевым энцефалитом.
3.2. Получение МКА к неструктурным белкам ВКЭ
3.2.1. Иммунизация.
3.2.2. Антигенная специфичность полученных МКА.
3.2.3. Изотип антител.
3.3. Выделение белка 1 методом аффинной хроматографии на
Сефарозе 4 с полученными иммобилизованными МКА.
3.4. Исследования свойств неструктурного белка 1 ВКЭ.
3.4.1. Антигенные детерминанты гликопротеина 1.
3.4.2. Антигенные детерминанты рекомбинантного белка 1.
3.4.3. Функциональная активность МКА и гипериммунных сывороток, специфичных к гликопротеину 1 и его генноинженерному аналогу.
3.4.4. Протективные свойства белка 1 ВКЭ.
3.5.1. Гетерокомплекс гликопротеинов Е и 1 ВКЭ.
3.5.2. Активность антисывороток, направленных к гликопротеину 1 ВКЭ,
3.5.2. Активность антисывороток, направленных к гликопротеину 1 ВКЭ,
в реакциях специфичных для гликопротеина Е.
3.5.3. Условия комплексообразования.
3.5.4. Локализация гетерокомплекса белков 1 ВКЭ. ЮЗ
Выводы.
Список литературы


Повидимому, протеолитическое расщепление ргМ представляет собой последнюю стадию, дающую полностью инфекционный вирус. Рис. Схематическая модель строения внутриклеточных и внеклеточных вирионов, согласно i . X. С . Нуклеокапсид представляет собой комплекс белка С мол. Да с вириоиной одноцепочечной РНК положительной полярности, чувствительной к действию рибонуклеаз и имеющей мол. Ю6 Да , , i, i , . Этот комплекс достаточно прочен и может быть разрушен при обработке нуклеокапсида 7 М мочевиной в присутствии 3 М iI . Прочных контактов между белками оболочки вирионов и нуклеокапсидом обнаружить не удалось . i , . Нуклеокапсид легко отделяется от оболочки при обработке вирусных частиц неионными детергентами , . Инфекционность нуклеокапсида или очищенной РНК значительно ниже, чем нативного вириона. В настоящее время установлены первичные структуры геномов некоторых флавивирусов желтой лихорадки штамм Д, западного Нила, Каньжин, японского энцефалита. Денге 2, Денге 4, энцефалита долины Мюррей, Денге 1, дальневосточных штаммов, Софьин и 5, трех центральноевропейских Найдорфл, Нург и 3 и вируса Повассан i а. Полная длина флавивирусного генома составляет в среднем тысяч нуклеотидных остатков н. Он содержит короткие 5 и 3 нетранслируемые области. РНК флавивирусов копирован , v i, i, . Знетранслируемая область не содержит полиАпоследовательности в случае флавивирусов, переносимых комарами , ,. i , . Геном вируса ВКЭ разделяет общие физические и генетические характеристики флавивирусов. ВКЭ содержит одноцепочечную РНК положительной полярности длиной около ,8 тысяч н. Добрикова, Плетнев, . Длина 5 некодирующего района РНК ВКЭ составляет 2 н. Вторичная структура его консервативна и, вероятно, необходима для репликации или упаковки геномной РНК флавивирусов i i, . Анализ РНК разных штаммов ВКЭ выявил существование двух разных типов 3некодирующих участков. Одна группа штаммов вирусов, включая штамм Найдорфл, имеет 3некодирующую область внутри вариабельной части которой присутствует полиА структура длиной от до 0 и. . . Другая группа штаммов вирусов содержит 3некодирующую область, которая неполиаденилирована , . Предполагается, что эта структура важна для узнавания матричной РНК вирусной репликазой при синтезе минусцепи РНК или упаковки вирусной РНК i . i . Показано, что 3концсвая вторичная структура является более стабильной по сравнению с 5концсвой i i, . Для всех геномных РНК установлена одна рамка считывания белка, которая покрывает почти весь геном флавивирусов. Единая протяженная открытая рамка считывания начинается с инициирующего кодона 35 н. 57 н о . Она кодирует полипротсин длиной а. ВКЭ штамм Софьин v , . РНК, позволили установить локализацию всех генов в геноме флавивирусов рис. Рис. Организация генома флавивирусов, согласно i . X. . Схема вирусного генома, содержащего кодирующие области структурных и неструктурных вирусных белков, объединенных единой открытой рамкой считывания, ограниченной короткими 5 и 3 некодирующими областями. Сарструктуру. В 5 концевой части генома кодируются структурные белки вириона в порядке С, ргММ и Е, а в 3 концевых 34 генома расположены гены 7 неструктурных белков 1, 2, 2, 3, 4, 4 и 5. При трансляции РНК этих вирусов синтезируется единый белокпредшественник, который подвергается процессингу на структурные и неструктурные белки , . Анализ данных определения аминокислотных последовательностей белков ВКЭ и сравнение с последовательностями других флавивирусов v . Барам и др. ВКЭ соответствует схеме, полученной и подтвержденной исследованиями экспрессии и трансляции i vi для других флавивирусов рис.