Исследование геномов вирусов герпетической группы и ретровируса HTLVI при лимфомах и ангиитах кожи методом полимеразной цепной реакции

• Автор: Хасан Хамад Али
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1998
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 110 с.

Список принятых сокращений
ЕВУ вирус Эпштейна-Барр
НБУ вирус простого герпеса
НБУІ вирус простого герпеса типа
ШУ2 вирус простого герпеса типа
СМУ цитомегаловирус
НТЬУІ вирус Т-клеточной лейкемии человека типа
ЛК лимфома кожи
ТКЛК Т-клточная лимфома кожи
ВКЛК В-клточная лимфома кожи
ЛБ лимфома Берркитта
ПЦР полимеразная цепная реакция
гПЦР “гнездовая” полимеразная цепная реакция
ЬСЬ лимфобластные клеточные линий
сть цитотоксические Т-лимфоциты
№С природные киллеры
сШТР ' - дезоксинуклеотидтрифосфаты
йатр дезоксиаденозинтрифосфат
сіТТР дезокситимидинтрифоефат
астр дезоксицитидинтрифосфат
астр дезоксигуанинтрифосфат
БЭБ додецилсульфат натрия
РВ8(ФСБ)- 0,145 М ИаС1, 0,76 тМ НаН2Р04- Н2<Э, тМ,Ка2 Р04 7Н20; pH 7
Н.п. нуклеотидные пары
ДР доксорубицин
ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ
1. Вирусы герпетической группы и ретровирус HTLV1
1.1. Вирусы герпетической группы: HSV1, HSV2, CMV и

1.1.1.Эпштейна-Барр вирус
1.1.2. Вирусы простого герпеса (HSV1, HSV2)
1.1.3. Цитомегаловирус (CMV)
1.2. Вирус Т-клеточной лейкемии человека типа I - HTLV1
2. Лимфомакожи
2.1. Т-клеточные лимфомы кожи
2.1.1. Грибовидный микоз
2.2.Патогенез Т- клеточных лимфом кожи
3.Ангииты кожи
3.1.Общее представление, классификация ангиитов кожи
3.2 .Патогенез ангиитов кожи
4. Полимеразная цепная реакция
4.1. Параметры влияющие на эффективность ПЦР..»
4.1.1. Денатурация ДНК - матрицы
4.1.2. Стадия гибридизации праймеров
4.1.3. Стадия полимеризации
4.1.4. Состав компонентов реакционной смеси
4.1.5. Температурный режим ПЦР
4.2. Практическое применение ПЦР

5. Апоптоз в патогенезе заболеваний
5.1. Апоптоз и вирусная инфекция
5.1.1. Вирусы, инициирующие апоптоз клеток
5.1.2. Вирусы, ингибирующие апоптоз клеток
5.2. Роль белка Вс1-2 в развитии опухолевых заболеваний
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
1 .Выделение мононуклеарных клеток
2. Подсчет клеток
3. Выделение ДНК фенолхлороформным методом
4. Полимеразная цепная реакция
4.1. Приготовление реакционной смеси
4.2. Проведение полимеразной цепной реакции
4.3. Электрофорез ДНК в агарозном геле
5.Разделение субпопуляций лимфоцитов
6. Проточная цитофлуориметрия
6.1. Культивирование клеток
6.2.Фиксация клеток
6.3. Окращивание ДНК клеток йодистым пропидием
и цитофлуориметрия
7. Статистика
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
1. Исследование содержания геномов вирусов герпетической группы и ретровируса HTLV1 у пациентов с ТКЛК
и ангиитами кожи
1,1. Анализ геномов вирусов EBV, CMV, HSV1 и
HSV2, у пациентов с ТКЛК

ДНК-фрагмента ограниченного местами посадки праймеров и накоплению этого специфического фрагмента, имеющего в связи с этим, конкретную молекулярную массу.
Таким образом, повторяя три стадии 20-30 раз за несколько часов получают миллионы копий специфического участка ДНК вируса, бактерии или геномной ДНК человека.
Накопление специфического ПЦР-продукта можно проиллюстрировать схемой приведенной на рис. 1.
Накопление специфического продукта ДНК в процессе ПЦР можно выразить следующей формулой:
(1+Х)п = У где X- эффективность ПЦР ,
п - количество проведенных циклов ,
У- выход специфического ПЦР-продукта после ‘п’ числа циклов.
Из данной формулы видно, что если эффективность ПЦР равна 1 или 100% , то количество специфического продукта после ‘п’ числа циклов (У) можно охарактеризовать формулой:
У= 2“
где 2п - продукт с неопределенной длиной, полученный в первом цикле, с каждой матрицы ДНК.
Специфичность ПЦР характеризуется специфичностью олигонуклеотидных праймеров комплементарных тому или иному специфическому участку ДНК-матрицы. Эффективность ПЦР зависит от целого ряда параметров.