Изучение GTP-связывающих белков, аденилатциклазы и гуанилатциклазы в клетках крови больных коронарным атеросклерозом

• Автор: Гуманова, Надежда Георгиевна
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1999
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 101 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
ВВЕДЕНИЕ
ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
вТР-связывающие белки, аденилатциклаза и гуанилатциклаза
1. Характеристика ОТР-связывающих белков
1.1. Олигомерные в-белки
1.1.1. «-Субъединица олигомерных (гетеротримерных) О-белков
1.1.2. ру-Субъединицы гетеротримерных О-белков
1.1.3. Группа олигомерных О-белков, устойчивых к действию коклюшного токсина
1.2. Мономерные О-белки
1.2.1. Группа ЭВв-устойчивых О-белков
1.3. Взаимодействие О-белков с гуаниновыми нуклеотидами
1.4. Механизм гидролиза йТР
1.5. Механизм активации О-белков рецептором
1.6. Механизм активации эффектора
1.6.1. Семейство РОЗ-белков
1.7. Функции О-белков
1.7.1. Биологическая роль пренилирования в нормальном функционировании О-белков
1.8. Идентификация О-белков
1.8.1. АОР-рибозилирование О-белков
1.8.2. АОР-рибозилированис О-белков под действием микробных токсинов
2. Аденилатциклазная система
3. Гуанилатциклаза (ГЦ)
3.1. Структура доменов рГЦ и их функции
3.2. Механизм активации рГЦ
3.3. СО-зависимая активация рГЦ
3.4. Регуляция экспрессии и активности рГЦ
3.5. Модуляция ферментативной активности рГЦ лекарственными препаратами
4. О-белки в эритроцитах человека
Атерогенез
1. Повреяодения сосудов и коронарный атеросклероз
2. Развитие атеросклероза
3. Тромбоциты и их роль в фиброзной организации пристеночных тромбов
4. Патогенез вазоконстрикции
5. Роль разрыва бляшек и тромбообразование в развитии коронарной болезни
6. Роль О-белков при различных патологиях сердечно-сосудистой системы
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
1. Объект исследования
1.1. Первая группа
1.2 Вторая группа
2. Препаративные методы исследования
2.1. Выделение эритроцитов и получение мембран
2.2. Выделение тромбоцитов и получение мембранной и растворимой фракции
2.3. Получение препарата АЦ
3. Аналитические методы исследования
3.1. Определение активности Оз-белка в мембранах эритроцитов
3.2. [12Р]АОР-рибозилированис мембран эритроцитов под действием холерного и коклюшного токсина
3.3. Электрофорез в ПААГ в присутствии БОБ и получение количественных результатов
3.4. Определение ОТР-связывающей активности белка 027К (Ка1) в мембранах эритроцитов
3.5. Определение активности аденилатциклазы в мембранах тромбоцитов
3.6. Определение активности растворимой гуанилатциклазы в цитозоле тромбоцитов

3.7. Определение активности ГАФД в цитозоле тромбоцитов
3.8. Определение количества ГАФД в цитозоле тромбоцитов методом иммуноблоттинга
3.9. Реактивы, радиоиммунные исследования содержания гормонов и липидов
4. Статистика
РЕЗУЛЬТАТЫ
1. Исследование С-бслков в мембранах эритроцитов
1.1. Исследование высокомолекулярных С-бслков в мембранах эритроцитов
Данные представлены в виде среднее+стандартная ошибка
1.2. Исследование низкомолекулярного О-белка с м.м. 27кДа в мембранах эритроцитов
2. Исследование активностей аденилатдиклазы в мембранах тромбоцитов, растворимой формы гуанилатциклазы, глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназы (ГАФД) и ее содержания в цитозоле тромбоцитов
2.1. Измерения активности АЦ в мембранах тромбоцитов
2.2. Измерение активности растворимой гуанилатциклазы (рГЦ) в цитозоле тромбоцитов
2.3. Измерение активности и содержания глицеральдегид-З-фосфатдегвдрогеназы (ГАФД) в цитозоле тромбоцитов больных коронарным атеросклерозом
ОБСУЖДЕНИЕ
Заключение
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
АЦ - аденилатциклаза
ГАФД - Б-глицеральдегид-З-фосфат дегидрогеназа (КФ 1.2.2.12)
ГЦ - гуанилатциклаза
ДТТ - дитиотреитол
ИБС - ишемическая болезнь сердца
КТ - коклюшный токсин
ПААГ - полиакриламидный гель
рГЦ - растворимая гуанилатциклаза
Трис - трис(гидроксиметил)аминометан
ХТ - холерный токсин
ЭДТА - этилендиаминтетраацетат
С27К - мономерный Є-белок с м. м. 27 кДа
ОІ - ингибирующий С-белок
во - С-белок нервной ткани
(лррМГр - гуанилил-(|3,у-имидо)-дифосфат
Об - стимулирующий О-белок
& -трансдуцин
ОТРу8 - гуанозин-(5'-у-тио)трифосфат НМО-СоА - З-гидрокси-З-метил глутарил-СоА ІШБ-белки - Є- белки, регуляторы сигнальной функции БББ - додецилсульфат натрия

структурные, а функциональные изменения (ангиоспазм) (Ламбич, Стожинич, 1990).
1. Повреждения сосудов и коронарный атеросклероз.
Ключевым моментом начала и развития атеросклероза и острых коронарных синдромов являются повреждения сосудов и образование тромба. Чтобы понять патогенез различных сосудистых заболеваний и разработать стратегию их лечения, можно разделить сосудистые повреждения по степени тяжести на три типа (Fuster et al. 1992).
- Первый тип включает функциональные нарушения эндотелиальных клеток без каких-либо существенных морфологических изменений (Ross, 1986);
- второй тип включает денудацию эндотелиальных клеток и повреждение интимы, не затрагивающие внутреннюю эластичную перегородку (Stary, 1989);
- к третьему типу относятся денудация эндотелия, сопровождающаяся повреждениями интимы и медии (Davies et al., 1988).
При спонтанном атеросклерозе небольшие хронические повреждения артериального эндотелия происходят, как правило, при изменении тока крови в определенных участках артериального древа, таких как места изгибов или ветвления сосудов (Ross 1986; Glagov et al., 1988). В экспериментах на животных было установлено, что легкие хронические повреждения эндотелия можно спровоцировать гиперхолестеринемией, циркуляцией вазоактивных аминов, иммунокомплексов, инфекциями, химическими раздражителями, содержащимися в табачном дыме (Fuster et al., 1990). Различия в локальной восприимчивости эндотелия к этим факторам играют не менее существенную роль, чем изменения тока крови в локализации незначительных эндотелиальных повреждений и инициации атеросклероза.
Нарушения первого типа характеризуются аккумуляцией липидов и моноцитов (макрофагов) в участке повреждения (Ross 1986; Stary, 1989). Высвобождение токсических веществ макрофагами, как правило, приводит к повреждениям второго типа, основной чертой которых является адгезия тромбоцитов (Ross 1986; Stary, 1989,; Spurlock et al , 1987; Davies et al., 1988). Макрофаги, тромбоциты и эндотелий экскретируют различные факторы роста, которые могут стимулировать миграцию и пролиферацию гладкомышечных клеток, что вызывает либо фибро-интимальные повреждения (Ross 1986; Stary, 1989), либо образование наружных капсул в местах отложения липидов (Stary, 1989,; Falk, 1985). Повреждения третьего типа возникают в результате разрыва этих тонких капсул, в результате которого происходит образования тромба (Richardson et al., 1989). В случае, если тромбы небольшого размера, они могут организовываться и участвовать в формировании атеросклеротической бляшки (Stary, 1989; Davies et al., 1988; Richardson et al., 1989; Falk,