Эритроциты как переносчики антрациклиновых антибиотиков

• Автор: Скороход, Алексей Анатольевич
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2000
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 111 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ
Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
Г Оптимизация действия лекарственных препаратов при использовании различных переносчиков
2. Эритроциты как переносчики лекарственных препаратов
3. Сведения об антрациклинбвых антибиотиках
4. Попытки использования эритроцитов как переносчиков антраииклиновых антибиотиков
5. Двухчастевая модель описания фармакокинетики после введения различных форм антраииклиновых антибиотиков
6. Сведения о гликопептидном антибиотике эремомиаине
Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
Г Связывание рубомииина и доксорубицина с эритроцитами человека
2. Повреждающее воздействие рубомицина и доксорубицина на эритроциты человека

3. Фармакокинетика рубомицина после введения эритроцитов-переносчиков рубомицина
4. Фармакокинетика доксорубицина после введения эритроцитов-переносчиков доксорубицина
5. Инкапсулирование эремомицина в мышиные и человеческие эритроциты, оценка
эффективности эритроцитов-переносчиков эремомицина
Глава 4. ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
Список сокращений:
РЭС - ретикулоэндотелиальная система;
ОЛ - острый лейкоз;
ЭФП - электорофоретическая подвижность;
КПДА - кровь прединкубированная с рубомицином (даунорубицином);
КПДО - кровь прединкубированная с доксорубицином;
АЭНДО - аутозритроциты, нагруженные доксорубицином;
ДЭНДО - донорские эритроциты, нагруженные доксорубицином;
Т1 — фармакокинетический параметр, время полувыведения препарата в быстрой фазе выведения препарата из кровотока;
Т2 - фармакокинетический параметр, время полувыведения препарата в медленной фазе выведения препарата из кровотока;
ППК - фармакокинетический параметр, площадь под фармакокинетической кривой;
НЬ - гемоглобин;
Ш - гематокрит суспензии (отношение объема клеток к общему объему суспензии).
ВВЕДЕНИЕ
Актуальность темы
Одно из направлений современной фармакологии - поиск и использование переносчиков лекарственных препаратов [1, 2]. Снижение токсичности препарата и увеличение его эффективности при использовании переносчиков может быть достигнуто за счет уменьшения максимальной концентрации препарата в крови при увеличении времени его циркуляции либо за счет преимущественной доставки препарата в пораженные органы и ткани. В качестве переносчиков лекарственных препаратов могут выступать макромолекулы, частицы (микросферы и микрокапсулы) и клетки [1, 2]. В качестве клеток-переносчиков наиболее удобны эритроциты из-за доступности, биосовместимости и способности к биодеградации. Эритроциты-переносчики могут использоваться для решения многих медицинских проблем, таких как коррекции метаболизма, лечение ферментопатий. Они представляются перспективными в терапии онкологических заболеваний, где актуальна проблема снижения токсичности противоопухолевых препаратов, их пролонгированного действия, а также направленного транспорта этих препаратов в опухолевые ткани. Эритроциты могут быть использованы как переносчики антрациклиновых антибиотиков рубомицина и доксорубицина, которые являются базисными препаратами в терапии гемобластозов. Методики введения различных препаратов в эритроциты просты и достаточно эффективны: в частности, нагруженные антрациклиновыми антибиотиками эритроциты могут быть легко получены за счет связывания этих препаратов клетками в изотонической среде.
Преимущества использования нагруженных антрациклиновыми антибиотиками эритроцитов по сравнению со стандартными формами этих препаратов показаны в ряде экспериментов на культурах клеток и на животных [3-8]. Описаны случаи использования эритроцитов, нагруженных доксорубицином, в ветеринарии [9], а также единичные случаи применения их в клинической практике [10-12]. Эритроциты-переносчики доксорубицина приводили к существенному изменению фармакокинетики доксорубицина, увеличивая время его циркуляции в крови в несколько раз [11-12].
Однако, несмотря на обнадеживающие результаты, существует проблема повреждения эритроцитов при приготовлении эритроцитов-переносчиков. Важным вопросом является выяснение способности эритроцитов-переносчиков нормально циркулировать в кровотоке, т.е. сохранения их деформируемости. Также до конца не выяснено, насколько отличается связываемость антрациклиновых антибиотиков эритроцитами доноров и эритроцитами больных.

Было исследовано связывание рубомицина и доксорубицина с эритроцитами здоровых доноров и пациентов. Эти исследования проводились в цельной крови и в суспензии отмытых клеток. Для этого к цельной крови или суспензии эритроцитов добавлялся раствор рубомицина или доксорубицина, после чего смесь инкубировали при перемешивании в течение трех часов при 37°С. Для отмывки и инкубации отмытых эритроцитов использовался изотонический буферный раствор PBS. Во время инкубации отбирались образцы для определения концентрации препарата в пробе и во внеклеточной среде (для отделения клеток образцы центрифугировались 10 минут при 1000 g). Концентрация рубомицина в эритроцитах рассчитывалась на основании данных о его концентрации в крови (в суспензии) и во внеклеточной среде по формуле:
Се = (Со - Cm(l - Ht))/Ht

Се - концентрация антибиотика в эритроцитах,
Со - концентрация антибиотика в крови (в суспензии),
Cm - концентрация антибиотика в среде,
Ht - значение гематокрита крови (суспензии).
Рубомицин и доксорубицин из образцов экстрагировался с помощью хлороформа. С этой целью к 1 мл образца добавлялось 10 мкл 1,6М К2СОз и 3 мл хлороформа. Смесь интенсивно встряхивалась и центрифугировалась 3 мин при 1000 g. Хлороформный экстракт (нижний слой в центрифужной пробирке) аккуратно отбирался стекляным шприцом. Концентрация препарата в хлороформных экстрактах определялась спектрофотометрически по поглощению света на длине волны 486 нм для рубомицина и 500 нм для доксорубицина (точность измерения 5%). Для калибровки использовались хлороформные экстракты растворов рубомицина и доксорубицина известной концентрации.
Отдельно было проверено возможное связывание рубомицина с полимерным контейнером, а также изучена кинетика связывания эритроцитов с рубомицином в полимерном контейнере (связывание эритроцитов с доксорубицином в полимерном контейнере было исследовано ранее в нашей лаборатории). Для проверки возможного связывания рубомицина с полимерным контейнером в контейнер помещался раствор рубомицина с концентрацией 0,5 мг/мл, 1,0 мг/мл и 5,0 мг/мл и инкубировался при 37°С. В течение инкубации из контейнера отбирались образцы для определения концентрации рубомицина в растворе. Для изучении кинетики связывания эритроцитов с рубомицином в контейнере полимерный контейнер, содержащий консервированную эритроцитарную массу, предварительно термостатировался в водном термостате 1 час, после чего в него