Особенности ионного обмена в клетках при циклоспорин-зависимой гипертонии

• Автор: Афанасьева, Галина Вячеславовна
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2000
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 155 с. : ил.

Оглавление.
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
ВВЕДЕНИЕ
ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1. Основные механизмы поддержания высокого давления при артериальных гипертензиях различной этиологии
1.1 .Классификация артериальных гипертензий по этиологии заболевания
1.2.Общая характеристика систем регуляции артериального давления
1.3. Почечно-объемный механизм
1.4. Ренин-ангиотензин-альдостероновая система
1.5. Роль повышенного периферического сосудистого сопротивления в патогенезе артериальной гипертензии
2. Циклоспорин А как один из представителей класса препаратов-иммунодепрессантов. Взаимодействие циклоспорина А с различными биохимическими системами клетки
2.1. Общая характеристика циклоспорина А
2.2.Структура и пути метаболизма циклоспорина А
2.3. Молекулярный механизм действия циклоспорина А как иммунодепрессанта. Аналоги циклоспорина А
2.4. Иммунофилины: локализация в клетке и участие в подавлении иммунного ответа
2.5. Другие функции иммунофилинов в клетке
2.5.1.Иммунофилины как ферменты фолдинга

2.5.2. Иммунофилины как стресс-белки
2.5.3. Участие иммунофилинов в организации рецепторов и ионных каналов
2.5.4.Иммунофилины в роли цитокинов
2.6.Эффекты циклоспорина А, не связанные с подавлением иммунного ответа
2.6.1 .СэЛ-зависимая генерация свободных радикалов
2.6.2.Влияние СзА на сократимость сосудов
2.6.3. Влияние СэА на регуляцию внутриклеточного кальция
2.6.4.Другие эффекты СвА, способные влиять на вазоконстрикцию
2.6.5.Действие СзА на функцию почки
Заключение
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
1. Выделение и культивирование гладкомышечных клеток сосудов человека и
крысы
2 Предобработка клеток
3.Выделение тромбоцитов
4. Измерение концентрации внутриклеточного кальция
в тромбоцитах
в ГМК
5. Определение скорости выхода кальция из культивируемых гладкомышечных клеток
6.Связывание меченного 125|-АИ
7.Измерение содержания продуктов метаболизма циклоспорина А в культивируемых
ГМК аорты крысы
8. Изучение сокращения изолированных сегментов аорты крысы
9. Измерение мембранного потенциала
в тромбоцитах
в гладкомышечных клетках
в эритроцитах
' 0 Определение скорости Ча'-Н' -обмена
11. Экспериментальная модель циклоспорин-зависимой гипертонии
12. Получение |;? гибридов крыс ЩНРхУУЮО
13. Анализ спектра структурных белков мембраны эритроцитов у Р2 гибридов крыс
(Энросмку;
14.Статистическая обработка результатов
15. Материалы
РЕЗУЛЬТАТЫ
1. Циклоспорин А вызывает подъем давления у крыс линии Л/КУ
2.Циклоспорин А вызывает усиление сократимости сосудов и увеличение кальциевого ответа на вазоконстрикторные гормоны в ГМК аорты крысы
3. СэЛ увеличивает выход А5Са2г и подъем цитоплазматического кальция в ответ на АН в культивируемых ГМК аорты человека
4.Усиление кальциевого ответа в ГМК аорты человека сопровождается увеличением

Показано, что субстратами CytP3A является не только CsA, но и многие широко используемые препараты, в том числе кальциевые антагонисты верапамил и никардипин, некоторые антибиотики, стеоридные гормоны тестостерон и эстрадиол, поэтому сочетание циклосприна А с этими препаратами может изменять метаболический профиль и скорость выведения циклоспорина А из организма. Распад циклоспорина А может происходить не только в печени, но и в почках, кишечнике, гладкомышечных клетках сосудов и даже в эритроцитах, поскольку во всех перечисленных объектах обнаружен CytP3A [Vickers et al., 1992].
2.3. Молекулярный механизм действия циклоспорина А как иммунодепрессанта. Аналоги циклоспорина А.
При подавлении иммунного ответа первичной мишенью циклоспорина А является белок циклофилин А (СурА), названный так именно из-за своей способности взаимодействовать с циклоспорином A [Handchumacher et al., 1984]. Белок-мишень, с которым связывается комплекс CsA-циклофилин, был идентифицирован с помощью метода аффинной хроматографии [Tropschug et al., 1989]. Показано, что это серин-треонин фосфатаза кальцинейрин (CN), состоящий из двух субъединиц - каталитической и регуляторной. Кроме того, с кальцинейрином связан кальмодулин, опосредующий активацию этого фермента ионами кальция. Комплекс циклоспорин А-циклофилин связывается с кальцинейрином, ингибируя фосфзтазную активность фермента [Fruman et al., 1992; Liu et al., 1992]. Тем самым блокируется путь передачи сигнала от рецептора на поверхности Т-лимфоцитов к ядерным факторам транскрипции, регулирующих продукцию интерлейкинов, в частности IL-2 [O’Keefe et al., 1992] (рис.5).