Роль коллаген-специфических интегринов в апоптозе и инвазии опухолевых клеток

• Автор: Козлова, Надежда Ивановна
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2002
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 115 с. : ил

СОДЕРЖАНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
ВВЕДЕНИЕ
I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
Глава 1. Структура интегринов
1.1. Структура а-субъединиц
1.2. Структура (3-субъединиц
1.3. Надмолекулярная структура интегриновых димеров
в плазматической мембране
Глава 2. Функции интегринов
2.1. Лигандная специфичность
2.2. Роль интегринов в организации фокального контакта
2.3. Роль интегринов в эмбриогенезе, дифференцировке и пролиферации клеток
2.4. Механизмы внутриклеточной сигнализации с участием
интегринов
2.4.1 Роль фосфокиназы клеточного контакта ,
2.4.2. Роль других фосфокиназ
Глава 3. Роль интегринов в апоптотической гибели клеток
3.1. Субстрат-зависимый апоптоз - аноикис
3.2. Механизмы внутриклеточной сигнализации при аноикисе
3.3. Роль индивидуальных интегринов в аноикисе
3.4. Роль интегрина смфЗ в аноикисе
Глава 4. Роль интегринов в механизмах злокачественного роста
4.1. Изменения матрикс-клеточных взаимодействий и
интегринов при онкогенезе
4.2. Изменения матрикс-клеточных взаимодействий и

интегринов при инвазии и метастазировании опухолей

4.3. Роль интегрина аурЗ в инвазии и метастазировании опухолей
II. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
И.1 Буферные растворы и реагенты
II.2 Клеточные модели
П.З Методы исследования
III. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Часть I. Исследование интегринов опухолевых клеток,
различающихся по субстратной зависимости апоптоза
Глава 1. Получение клеточных популяций, различающихся по чувствительности к аноикису, и определение
их сродства к белкам матрикса
1.1. Определение чувствительности клеток Сасо-2 к аноикису
1.2. Получение аноикис-резистентных клеток
1.3. Адгезия аноикис-чувствительиых и аноикис-резистентных
клеток на белках матрикса
Глава 2. Экспрессия интегринов в аноикис-чувствительных и аноикис-резистентных клетках
2.1. Исследование экспрессии интегринов в клеточной мембране аноикис-чувствительных и аноикис-резистентных
клетках
2.2. Количественный анализ поверхностной экспрессии интегринов
2.3. Анализ экспрессии генов ал -и (ЗЗ-субьединиц в аноикис-
чувствительных и аноикис-резистентных клетках
Глава 3. Влияние усиления или торможения активности

интегрина ау(33 на аноикис клеток Сасо-
3.1. Влияние активации аурЗ
3.2. Влияние торможения трансляции мРНК ау-субъединицы
Часть И. Исследование интегринов онкотрансформированных
фибробластов, различающихся по инвазии и метастазированию
Глава 1. Сродство к белкам матрикса и экспрессия
интегринов ВСР-трансформированными фибробластами с
различной метастатической активностью
1.1.Адгезия на субстратах из белков матрикса
1.2. Поверхностная экспрессия интегринов в линиях ВСР-трансформированных фибробластов, различающихся по
метастатической активности
Глава 2. Исследование инвазивной активности и продукции матрикс-специфических коллагеназ в линиях ВСР-трансформированных фибробластов с различной
метастатической активностью
2.1. Исследование инвазии в гель из белков внеклеточного матрикса
2.2. Исследование коллагенолитических ферментов
Глава 3. Роль интегринов в инвазии ВСР-трансформированных фибробластов и продукции ММП-
3.1. Эффект ингибирования тирозиновых фосфокиназ
3.2. Эффект стимулирования интегринов субстратом и
ингибирования антагонистами
IV. ОБСУЖДЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

которое индуцируется гиперэкспрессией a5ßl; очевидно, в таких клетках значительная часть молекул рецептора не связана с лигандом. Она также помогает понять, по крайней мере, некоторые особенности такого феномена как субстратная зависимость клеточного роста. Известно, что большинство типов нормальных клеток размножаются только будучи связанными с субстратом, и эта зависимость снижена или полностью отсутствует в онкотрансформированных и опухолевых клетках [Васильев и Гельфанд,1981; Folkman & Moscona, 1978]. В контексте этих рассуждений можно объяснить и противоречивые сведения об изменениях экспрессии интегрина a5ßl (возможно, и других интегринов) в трансформированных и опухолевых клетках. По-видимому, для развития опухоли существенное значение имеют не столько количественные изменения содержания рецептора на клеточной поверхности, сколько соотношение между рецептором и субстратом. Очевидно, этот вывод нуждается в подтверждении, которое может быть получено при анализе других рецепторов.
4.2. Изменении матрикс-клеточных взаимодействий и интегринов при инвазии и метастазировании опухолей
Сродство между отдельными субстратами матрикса и опухолевыми клетками изменяется при злокачественной прогрессии последних. Высоко метастазирующая линия меланомных клеток отличается от меланоцитов и слабо метастазирующей линии более высоким сродством к коллагену и ламинину [Danen et.al., 1993]. Адгезия клеток фибросаркомы, характеризующихся высокой метастатической активностью, на коллагеновом субстрате существенно выше, чем слабо метастазирующих клеток [Kogawa et.al., 1993]. Аналогичная тенденция выявилась при анализе слабо и активно метастазирующих линий клеток карциномы кишечника: метастазирующие клетки проявляли более высокое сродство к различным типам коллагена, фибронектину и ламинину [Komada et.al., 1993].
Большое число исследований посвящено модификациям и роли интегринов в прогрессии опухолей — в механизмах инвазии и метастазировании [Dedhar, 1990; Aznavoorian & Murphy 1993; Ruoslahti, 1994-95; Nip & Brodt, 1995; Heino, 1996; Meyer & Hart, 1998]. Вовлеченность интегринов в эти процессы была убедительно продемонстрирована в моделях спонтанного и экспериментального метастазирования клеток меланомы, которые вводились животным совместно с аитиадгезивными (RGD-содержащими) олигопептидами [Humphries et.al., 1986; Humphries et.al., 1988; Saiki et.al., 1989]. Оказалось, что эти пептиды резко тормозят развитие метастазов в ткани