Нейроспецифические белки в оценке проницаемости гематоэнцефалического барьера человека и животных

• Автор: Рябухин, Игорь Александрович
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Докторская
• Год защиты: 2004
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 297 с.

Оглавление
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ, ИСПОЛЬЗУЕМЫХ В ДИССЕРТАЦИИ:
ВВЕДЕНИЕ
Актуальность проблемы
Цель работы
Задачи исследования
Научная новизна работы
Практическая ценность
Основные положения, выносимые на защиту
ГЛАВА 1. РОЛЬ И ЗНАЧЕНИЕ НСБ И АТ К НИМ В ДИАГНОСТИКЕ СОСТОЯНИЙ, СОПРОВОЖДАЮЩИХСЯ НАРУШЕНИЕМ
ПРОНИЦАЕМОСТИ ГЭБ
1.1. ГЕМАТОЭНЦЕФАЛИЧЕСКИЙ БАРЬЕР— СТРОЕНИЕ, РОЛЬ И ФУНКЦИЯ В ОРГАНИЗМЕ
1.2. Морфология плотных контактов гематоэнцефалического барьера
1.3. Молекулярная структура плотных контактов
1.3.1. Белки адгезивных соединений
1.3.2. Белки плотных контактов
1.4. Проницаемость ГЭБ в норме и при патологии
1.5. НСБ — идентификация, физико-химические свойства и клеточная локализация
1.5.1. Глиофибриллярный кислый протеин (ОГАР)
1.5.1.1. Идентификация, очистка и физико-химические свойства СБАР
1.5.1.2. Тканевая и клеточная локализация ОБАР
1.5.2. Нейроспецифическая енолаза

1.5.2.1 ИДЕНТИФИКАЦИЯ, ОЧИСТКА И ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА НЕЙРОСПЕЦИФИЧЕСКОЙ ЕНОЛАЗЫ
1.5.2.2. Тканевая и клеточная локализация ЫБЕ
1.5.3. Альфа-2-гликопротеин (сс2ОР)
1.5.3.1. ИДЕНТИФИКАЦИЯ, ОЧИСТКА И ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА а2ОР
1.5.3.2. Клеточная локализация а2СР
1.5.4. Специфические а] и а2 глобулины мозга (оВв и а2ВО)
1.5.4.1. Идентификация, очистка и физико-химические свойства оВв и а2ВО
1.5.4.2. Клеточная локализация сиВО и а2ВО
1.6. Роль НСБ В ДИАГНОСТИКЕ СОСТОЯНИЙ И ЗАБОЛЕВАНИЙ, СОПРОВОЖДАЮЩИХСЯ НАРУШЕНИЕМ БАРЬЕРНОЙ ФУНКЦИИ ГЭБ
1.6.1. Патофизиологические аспекты повреждения ГЭБ
1.6.2. КЛИНИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ НСБ
1.7. РОЛЬ АНТИ-НСБ АТ В ДИАГНОСТИКЕ СОСТОЯНИЙ И ЗАБОЛЕВАНИЙ, СОПРОВОЖДАЮЩИХСЯ НАРУШЕНИЕМ БАРЬЕРНОЙ ФУНКЦИИ ГЭБ
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1. Общие биохимические методики, применяемые при выделении и очистке нейроспецифических белков
2.2. Методы иммунохимического анализа
2.3. Методы выделения и очистки белков
ГЛАВА 3. РАЗРАБОТКА И СТАНДАРТИЗАЦИЯ
ИММУНОФЕРМЕНТНЫХ ТЕСТ-СИСТЕМ АНАЛИЗА НСБ И АНТИ-НСБ-

3.1. Получение высокоочищенных препаратов НСБ

3.2. Получение моноспецифических анти-НСБ антисывороток и препаратов АТ
3.3. «Сендвич»-вариантиммуноферментного анализа СТАР, ЫБЕ, аЮР и соответствующих АТ к ним
3.4. Двухцентровой иммуноферментный анализ си ВЦ и а2ВО на основе колоночного микрореактора (КМР)
3.5. Общие вопросы стандартизации иммуноферментного анализа
ГЛАВА 4. РЕЗУЛЬТАТЫ ИММУНОФЕРМЕНТНОГО АНАЛИЗА НСБ В СЫВОРОТКЕ КРОВИ И ЛИКВОРЕ БОЛЬНЫХ С ЗАБОЛЕВАНИЯМИ, СОПРОВОЖДАЮЩИМИСЯ НАРУШЕНИЕМ ФУНКЦИИ ГЭБ
ГЛАВА 5. РЕЗУЛЬТАТЫ ИММУНОФЕРМЕНТНОГО АНАЛИЗА АТ К НСБ В СЫВОРОТКЕ КРОВИ И ЛИКВОРЕ БОЛЬНЫХ С ЗАБОЛЕВАНИЯМИ, СОПРОВОЖДАЮЩИМИСЯ НАРУШЕНИЕМ ФУНКЦИИ ГЭБ
ГЛАВА 6. СРАВНИТЕЛЬНЫЙ АНАЛИЗ РЕЗУЛЬТАТОВ КОМПЛЕКСНОГО И ИНДИВИДУАЛЬНОГО ИММУНОХИМИЧЕСКОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ НСБ И АТ К НИМ В СЫВОРОТКЕ КРОВИ И ЛИКВОРЕ БОЛЬНЫХ С ЗАБОЛЕВАНИЯМИ, СОПРОВОЖДАЮЩИМИСЯ
НАРУШЕНИЕМ ФУНКЦИИ ГЭБ
ГЛАВА 7. ИССЛЕДОВАНИЕ ПРОНИЦАЕМОСТИ ГЭБ В
ЭКСПЕРИМЕНТЕ
7.1. Экспериментальные методы моделирования прорыва ГЭБ с применением индуцированной нейролепсии
7.2. Экспериментальные методы моделирования прорыва ГЭБ с
использованием острой экспериментальной ишемии головного мозга
7.3. Экспериментальное моделирование повреждения ГЭБ,
ВЫЗЫВАЕМОЕ ИНДУЦИР О ВАННЫМИ ГИПЕРТЕРМИЧЕСКИМИ СУДОРОГАМИ

дет к накоплению натрия в клетке. Это уменьшает эффективность Иа+/Са2+ обмена, как следствие — накопление кальция в клетке. Далее ингибируется Са2+ -АТФ-аза с последующим увеличением внутриклеточного кальция. Возможно, именно это быстрое увеличение внутриклеточного кальция и ведет к увеличению эндотелиальной проходимости за счет изменения пиноци-тоза. Для доказательства этой гипотезы было проведено ультрацитохимиче-ское исследование локализации Са 2+-АТФ-азы и Иа+-К+-АТФ-азы с использованием фиксированных мозговых срезов от крыс, подвергшихся острой гипертензии, которым была введена НИР как маркер изменения проницаемости ГЭБ [303]. Это исследование продемонстрировало уменьшение локализации обоих ферментов, что указывало на снижение активности, но только в артериолярных сегментах, которые показали проницаемость по отношению к пероксидазе хрена. Дальнейшие исследования показали, что уменьшение активности эндотелиальной плазматической мембранной Са 2+-АТФ-азы и Иа+/К+ -АТФ-азы предшествовало «пробою» ГЭБ для эндогенных плазменных белков при хронической гипертонии [300]. Таким образом, эти работы поддерживают гипотезу о влиянии Са2+-АТФ-азы на изменение пиноцитоза в эндотелиоцитах, формирующих ГЭБ.
Другими компонентами, способными вызывать (усиливать) пиноцитоз в эндотелии мозговых капилляров являются биогенные амины типа брадики-нина [351], гистамина [128], серотонина и цАМФ [439]. Изучение клеточных культур мозгового эндотелия выявило влияние цАМФ и арахидоновой кислоты на активацию пиноцитоза и транспортировку альбумина [221].
Еще одна структура, по-видимому, ответственная за повышенную проницаемость ГЭБ, - это тубуло-канальцевые структуры. Тубуло-канальцевые структуры — не постоянная находка в нормальном эндотелии. Однако, в областях серьезного повреждения ГЭБ такие структуры, содержащие перок-сидазу хрена, наблюдаются лишь как дополнение к увеличенному пиноци-тозу в эндотелии, главным образом микрососудистого русла [56, 262].