Оптико-биосенсорный анализ термодинамических характеристик белок-белковых комплексов

• Автор: Раченкова, Наталья Ивановна
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2005
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 127 с.

ВВЕДЕНИЕ ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
Метод оптического биосенсора для исследования взаимодействия биомолекул в реальном времени Термодинамические параметры.
Растительные белковые ингибиторы протеолитических ферментов
Ингибиторы протеиназ из бобовых. Распространение и классификация
Семейство ингибитора Кунитца Реактивные центры ингибиторов Механиз действия ингибиторов Калликреин-кининовая система Калликреины
Прекалликреин и калпикреин плазмы крови Контактная система активации прекалликреина Тканевые калликреины
Общие представления о молекулярной организации электрон-транспортных цепей в Р450-содержащих монооксигеназных системах
Молекулярная организация электрон-транспортной цепи
Р450сат-содержащей монооксигеназной системы
Рапамицин и РКРВ
Рапамицин и цикпоспорины
Иммунофилины
Актинопорины
Фармакологические исследования актинопоринов
Механизм действия актинопоринов
ЙТХ-БII -актинопорин тропической актинии РасИап^ив
тасгобас1у1из

3. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
3.1. Процедура иммобилизации белка на подложку кюветы
3.1.1. Иммобилизация белка на карбоксиметилдекстрановую и
аминосилановую кюветы
3.2. Расчет кинетических и термодинамических параметров
образования и распада комплексов
4. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
4.1. Анализ взаимодействия РРТ с STI
4.2. Анализ взаимодействия ВРС с ВРТ
4.3. Анализ взаимодействия РРК с STI
4.4. Анализ взаимодействия Р450 cam с t-, d-b5
4.5. Анализ взаимодействия FKPB с рапамицином
4.6. Анализ взаимодействия G-актина с RTX-SII
ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Список сокращений
РВЭЛ Фосфатно-солевой буфер
ЫНБ Ы-гидроксисукцинимид
ЕйС 1-этил-3-(3-диметиламинопропил)карбодиимид
КР калий-фосфатный буфер
Рс! Путидаредоксин
РбР путидаредоксин редуктаза
Аб Адренодоксин
АбИ адренодоксин редуктаза
Р450 сам цитохром Р450 сам
Ь5 цитохром Ь5
6-65 полноразмерный цитохром Ь5
1-Ь5 трункированный цитохром Ь5
ЫАРН Никотинамидадениндинуклеотид восстановленный
ЫАйРН Никотинамидадениндинуклеотидфосфат
восстановленный ЭИ соевый ингибитор трипсина (семейство Кунитца)
ВВ1 соевый ингибитор трипсина (семейство Баумана-Бирк)
РСБ (ЯВР) ретинол-связывающий белок
РРТ трипсин (свинной)
ВРС химотрипсин (бычий)
РВТ1 основной панкреатический ингибитор трипсина
РРК калликреин (свинной)
БКРВ БК-связывающий белок
РТХ-Э II актинопорин тропической актинии ЯасЛапМиз
тасгода^у/иэ
Кр константа равновесия реакции комплексообразования
коп константа скорости реакции ассоциации комплексов
кон константа скорости реакции диссоциации комплексов

наблюдениях (нефротический синдром, резистентный к стероидам, увеит, болезнь Бехчета, инсулинзависимый сахарный диабет, дерматомиозит/полимиозит). [Белоусов и соавт., 2000]
Рапамицин широко используется при пересадки органов для предотвращения реакции отторжения трансплантированных органов. Человеческий организм не умирает, как взорвавшийся воздушный шарик, - орган за органом постепенно теряют свои функции. Клинические методы пересадки органов разрабатываются для замещения органов, функция которых оказываетя необратимо утраченной. Поскольку на пути приживления в организме генетически чужеродной ткани стоит иммунологический барьер, что проявляется в реакции отторжения трансплантата, иммунологи и хирурги работают над поиском решения этой проблеммы.
Онтогенез иммунного ответа. Первыми незрелыми клеточными линиями, ; которые должны быть созданы, являются лимфоидная и миелоидная. Лимфоидные
клетки-предшественники мигрируют в вилочковую железу (Т-клетки) или в эквивалент сумки Фабрициуса (В-кпетки), чтобы дифференцироваться в зрелые Т- и В-лимфоциты. Два основных типа лимфоидных клеток - В- и Т-лимфоциты - играют главную роль в отторжении трансплантата. В-лимфоциты обеспечивают гуморальный ответ, или ответ антител на антиген, тогда как Т-лимфоциты ответственны за связанные с клетками функции иммунной системы. Существует два основных вида Т-лимфоцитов. С08+ зрелые Т-лимфоциты способствуют функциям клеток-эффекторов, таким как прямая цитотоксическая атака для отторжения трансплантата, тогда как СР4+ Т-лимфоциты играют роль иммунорегуляторов (хелперов) посредством секреции цитокинов, которые оказывают паракринный эффект, направленный на активацию или подавление чуть ли не всех механизмов иммунного ответа.
Т-лимфоциты представляют собой популяцию иммунокомпетентных клеток, ответственных, скорее, за клеточный, нежели гуморальный иммунитет. Ответы со стороны Т-лимфоцитов включают реакции гиперчувствительности замедленного типа, 5 антивирусную активность и многие из ранних реакций, участвующих в реакции
отторжения трансплантата.
В-лимфоциты развиваются из стволовых клеток костного мозга и становятся * ответственными за выработку иммуноглобулинов и тем самым - за гуморальный
иммунитет.