+
Действующая цена700 499 руб.
Товаров:
На сумму:

Электронная библиотека диссертаций

Доставка любой диссертации в формате PDF и WORD за 499 руб. на e-mail - 20 мин. 800 000 наименований диссертаций и авторефератов. Все авторефераты диссертаций - БЕСПЛАТНО

Расширенный поиск

Структура и свойства малого белка теплового шока с кажущейся молекулярной массой 20 кДа : Hsp20, HspB6

  • Автор:

    Букач, Олеся Владимировна

  • Шифр специальности:

    03.00.04

  • Научная степень:

    Кандидатская

  • Год защиты:

    2006

  • Место защиты:

    Москва

  • Количество страниц:

    149 с. : ил.

  • Стоимость:

    700 р.

    499 руб.

до окончания действия скидки
00
00
00
00
+
Наш сайт выгодно отличается тем что при покупке, кроме PDF версии Вы в подарок получаете работу преобразованную в WORD - документ и это предоставляет качественно другие возможности при работе с документом
Страницы оглавления работы

Список сокращений
Обзор литературы
1. Структура и свойства малых Нэр
1.1. Общие сведения о малых Нэр
1.2. Структура малых Нэр
1.3. Образование гетероолигомерных комплексов
1.4. Фосфорилирование малых №р
1.5. Шаперонная активность
2. Возможная функциональная роль Ньр20
2.1. Участие НБр20 в предотвращении агрегации тромбоцитов
2.2. Возможное участие Нэр20 в регуляции метаболизма глюкозы под
действием инсулина
2.3. Регуляция сократительной активности гладких мышц и возможное
участие №р20 в этом процессе
2.4. Возможное участие №р20 в регуляции сократительной активности и
апоптозе кардиомиоцитов
Материалы и методы
1. Препаративные методы
1.1. Получение высокоочищенных препаратов рекомбинантных Нэр20 и Нэр27 человека и их точечных мутантов с заменами, имитирующими фосфорилирование (Нзр2(ГО и Нэр27_30)
1.1.1 Получение препарата рекомбинантного Нзр20 дикого типа (Нэр20ШТ)
1.1.2. Получение высокоочищенного препарата рекомбинантного Нзр20 с заменой остатка Бег 16 на остаток аспарагиновой кислоты (Нэр2СЮ)
1.1.3. Получение высокоочищенных препаратов рекомбинантного Нэр27 дикого типа (Нзр27л/Т) и его мутанта с заменами остатков Бейб,5ег78, Бег82 на остатки аспарагиновой кислоты (Нэр27_30)
1.2. Выделение актина из ацетонового порошка скелетных мышц кролика
1.3. Выделение миофибрилл из скелетной и сердечной мышц человека или гладких мышц птиц
2. Методы, использованные для изучения свойств Нзр20
2.1. Определение олигомерного состояния Нэр20 методом гель-фильтрации
2.2. Определение молекулярной массы Нзр20 методом нативного электрофореза в градиенте пористости геля
2.3. Определение олигомерного состояния №р20 методом неравновесного аналитического ультрацентрифугирования
2.4. Изучение влияния pH на вторичную структуру Нэр20 методом кругового дихроизма (КД)

2.5. Изучение олигомерного состояния Нэр20 методом химического
«сшивания»
3. Определение шаперонной активности малых Няр
3.1. Влияние малых №р на агрегацию инсулина
3.2. Влияние малых Нэр на агрегацию алкогольдегидрогеназы
3.3. Влияние малых Нэр на агрегацию термически денатурированного
актина
4. Методы, использованные для изучения взаимодействия Нэр20 с другими белками
4.1. Изучение взаимодействия Нвр20 и Нэр27 методом гель-фильтрации
4.2. Влияние эНэр на полимеризацию актина
4.2.1 Метод ультрацентрифугирования
4.2.2 Метод флуоресцентной спектроскопии
4.3. Изучение взаимодействия Нэр20 с комплексами актин-связывающих
белков с Б-актином
4.3.1 Взаимодействие Нэр20 с комплексом Б-актин-тропомиозин
4.3.2 Взаимодействие №р20 с комплексом Р-актин-ос-актинин
4.3.3 Взаимодействие Нэр20 с комплексом Р-актин-кальпонин
4.3.4 Взаимодействие №р20 и миофибрилл
5. Некоторые аналитические методы
5.1. Электрофорез в ПААГ в присутствии БОБ
5.2. Изоэлектрофокусирование в денатурирующих условиях
5.3. Вестерн-блоттинг
5.4. Определение концентрации белка
5.4.1 Спектрофотометрический метод
5.4.2 Метод Брэдфорд
6. Состав и обозначение буферных растворов, использованных в работе
Результаты исследования
1. Выделение Нэр20 и его 5160 мутанта и определение их шаперонной активности
1.1. Выделение №р20
1.2. Определение шаперонной активности Нэр20
2. Изучение свойств Нзр20
2.1. Определение олигомерного состояния Нвр20
2.1.1 Влияние концентрации на олигомерное состояние Нзр20\ГГ
2.1.2 Влияние мутации, имитирующей фосфорилирование Бег16, на
олигомерное состояние Нэр20
2.2. Влияние pH на структуру и свойства Нзр20
2.2.1 Влияние pH на шаперонную активность Нэр20
2.2.2 Влияние pH на олигомерное состояние Нэр20
2.2.3 Влияние pH на вторичную структуру №р20
2.3. Влияние Нэр20 на агрегацию термически денатурированного актина
3. Взаимодействие Нзр20 с другими белками
3.1. Образование гетероолигомерных комплексов с №р27

3.2. Взаимодействие Нэр20 и актина
3.2.1 Влияние Нэр20 на скорость и степень полимеризации С-актина
3.2.2 Анализ взаимодействия Нэр20 с Р-актином и комплексами Р-актин-актин-связывающий белок
3.2.3 Взаимодействие Нэр20 и миофибрилл
Обсуждение результатов
1. Некоторые физико-химические свойства Нэр20
1.1. Олигомерное состояние и шаперонная активность №р20
1.2. Влияние pH на олигомерное состояние и шапероннуго активность Нэр20
2. Образование гетероолигомерных комплексов Нэр20 и Нвр27
3. Взаимодействие Нэр20 и актина
ВЫВОДЫ
Список литературы

Во втором случае проводили сшивание остатков лизина с помощью диметилсуберимидата (ОМБ). Нэр20 (0,75 мг/мл) в 0,2 М триэтаноламин-НС1 pH 7,5 инкубировали в присутствии 20 мМ ДМС в течение 1 часа при 20°С. Реакцию останавливали добавлением буфера для образцов для БПБ-электрофореза и анализировали белковый состав проб при помощи электрофореза в полиакриламидном геле по методу Лэммли.
В третьем случае проводили так называемую «нулевую сшивку». При этом проводили активацию карбоксильных групп белка растворимым карбодиимидом. В присутствии КГ-гидроксисукцинимида активированные карбоксильные группы эффективно реагируют со свободными аминогруппами белка с образованием изопептидных связей. Нэр20 (1 мг/мл) в 20 мМ имидазол-НС1 буфере pH 7,0, содержащем 150 мМ ЫаС1, инкубировали в присутствии 5 мМ ЕБС (1-(3-диметиламинопропил)-3-этилкарбодиимид) и 5 мМ їчГНБ (ЇЧГ-гидроксисукцинимид) в течение 1 часа при 30°С. Реакцию останавливали добавлением буфера для образцов для БПБ-электрофореза и анализировали белковый состав проб при помощи электрофореза по методу Лэммли.
3. Определение шаперонной активности малых Hsp.
Шаперонную активность малых белков теплового шока (Hsp20, Hsp27, их точечных мутантов и а-кристаллина) определяли по способности этих белков предотвращать агрегацию модельных белков-субстратов. В качестве субстратов были использованы инсулин, алкогольдегидрогеназа и термически денатурированный актин.
При использовании в экспериментах а-кристаллина, лиофилизированный препарат кристаллина из хрусталика глаза быка (Sigma) растворяли в буфере В, фильтровали через фильтры Millipore (0,2 цм) и хранили при 4°С в течение 1-2 суток.

Рекомендуемые диссертации данного раздела

Время генерации: 0.143, запросов: 967