Бактериолитический фермент эндо- -N-ацетилмурамидаза из Streptomyces levoris

• Автор: Шмакова, Зоя Федоровна
• Шифр специальности: 03.00.04, 03.00.07
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1984
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 175 c. : ил

ОГЛАВЛЕНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИИ, ВСТРЕЧАЮТСЯ В ДИССЕРТАЦИИ.

ВВЕДЕНИЕ.

Глава первая. БАКТЕРИОЖТИЧЕСКИЕ ФЕРМЕНТЫ Обзор литературы .

1. СУБСТРАТ БАКТЕРИОЛИТИЧЕСКИХ ФЕШЕНТОВ

2. КЛАССИФИКАЦИЯ, ХАРАКТЕРИСТИКА И ИДЕНТИФИКАЦИЯ ЛИТИЧЕС

КИХ ФЕРМЕНТОВ.

3. СУБСТРАТНАЯ СПЕЦИФИЧНОСТЬ ЛИРИЧЕСКИХ ФЕРМЕНТОВ.

4. БИОЛОГИЧЕСКАЯ РОЛЬ И ПРИМЕНЕНИЕ ЛИТИЧЕСКИХ ФЕШЕНТОВ . .

5. ЛИРИЧЕСКИЕ ФЕРМЕНТЫ, РАЗРУШАЮЩИЕ КЛЕТОЧНУЮ СТЕНКУ СТРЕПТОКОККА ГРУППЫ А

Глава вторая. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

1. ОБЪЕКТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ . . . . . ГтЧ
1.1. Методы культивирования актиномицетов .
1.2. Выращивание тесткультур .
2. ОБЩИЕ МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ, ИСПОЛЬЗОВАННЫЕ В РАБОТЕ
2.1. Электрофокусирование .
2.2. Дискэлектрофорез в полиакриламидном геле
2.3. Иммуноэлектрофорез
2.4. Получение ферментных литических препаратов из культуральной жидкости стрептомицетов . . . .
2.5. Получение клеточных стенок стрептококка.6
2.6. Получение пептидогликана из клеточных стенок стрептококка группы А
3. АНАЛИТИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ
3.1. Определение белка и сахаров
3.2. Определение свободных аминогрупп .
3.3. Определение аминокислотного состава литического фермента
3.4. Определение молекулярной массы литического фермента . .
3.5. Определение активности ферментов .
4. РЕАКТИВЫ.
Глава третья. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
1. ИЗЫСКАНИЕ АКТИНОМИЦЕТОВ ПРОДУЦЕНТОВ ФЕРМЕНТОВ,ЛИЗИРУЮЩИХ КЛЕТОЧНЫЕ СТЕНКИ СТРЕПТОКОККА ГРУППЫ А
2. ЛИТИЧЕСКИЕ ФЕРМЕНТЫ, ПРОДУЦИРУЕМЫЕ Э1гер1отусев 1еуог1в .
3. ВЫДЕЛЕНИЕ И ОПРЕДЕЛЕНИЕ СПЕЦИФИЧНОСТИ ЛИТИЧЕСКОГО ФЕРМЕНТА р ,8 ИЗ КУЛЬТУРАЛЬНОЙ ЖИДКОСТИ Э1гер1отусев
1ечог1в
3.1. Получение очищенного препарата литического фермента . .
3.2. Определение специфичности полученного фермента
р ,8.
4. ХАРАКТЕРИСТИКА ЭНДОП АЦЕТИЛМУРАМИДАЗЫ, СИНТЕЗИРУЕМОЙ Б1гер1отусев 1еУог1в
4.1. Молекулярная масса фермента
4.2. Аминокислотный состав фермента .
4.3. Влияние температуры на лизис клеточных стенок стрептококка группы А.
4.4. Лизис клеточных стенок стрептококка эндоб и ацетилмурамидазой в различных буферных системах
4.5. Литический спектр фермента, продуцируемого Э1гер1оту
сев 1еуог1з
5. ИЗУЧЕНИЕ ПРОДУКТОВ ЛИЗИСА КЛЕТОЧНЫХ СТЕНОК СТРЕПТОКОККА ГРУППЫ А ЭНДО А Н АЦЕТИЛМУРАМВДАЗОЙ гер
1еуог1з
Глава четвертая. ЗАКЛКНЕНИЕ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


, В. Авторы показали, что пептидогликан составляет самый внутренний слой многослойной стенки и может быть выделен в виде очень тонкого мешочка, сохраняющего форму и размер исходной клетки, после удаления внешних компонентов стенки, главными из которых яеляются белки, фосфолипиды и липополисахариды. Таким образом, пептидогликан, представляющий собой уникальную структуру, отвечает за механическую прочность клеточной стенки бактерий. Гидролиз тех или иных связей в этой структуре бактериолитическими ферментами приводит к лизису клеточной стенки и, следовательно, к гибели микроорганизма. Пептидогликан представляет собой сетку, состоящую из трех взаимосвязанных компонентов гликановых цепей, пептидных субъединиц и пептидных перекрестносвязывающих мостиков. Установлено, что гликановые цепи пептидогллкана являются регулярными полимерами, состоящими из чередующихся нацетилглюкозамина 2 пацетиламино2дезокси глюкоза и ПацетющурамоЕОй кислоты 2 Пацетиламино30 Iкарбоксиэтил 2дезокси глюкоза. Рядом исследователей были обнаружены минорные компоненты б гликановой части пептидогликана, а именно гидроксильная группа у шестого атома углерода мурамовой кислоты часто замещена на 0 ацетильную . , I0 i . i . ИЛИ фоофодиэфирную группы. Последняя может образовывать связи с другими полимерами клеточной стенки, такими как полисахариды . i , аминогруппа глюкозаминовых остатков может быть частично свободной, что возможно, обусловливает устойчивость пептидогликанов к действию лизоцима i . . i . ацетильные группы могут быть заменены гликолильными Савельев и Петров, . Пептидные субъединицы короткие пептидные цепочки, присоединенные амидной связью к карбоксильным группам 30лактильных остатков мурамовых кислот аминогруппами концевых ь аланина пептидных субъединиц. В отличие от гликановых цепей, состав пептидных субъединиц значительно более вариабелен у различных видов бактерий. На рис. Наиболее обычные пептидные субъединицыэто пептиды А,В и С. Но встречаются и модификации. Так, при выращивании i на средах, где отсутствует лизин, последний замещается в пептидных субъединицах на гидроксилизин. I. Гликановые цепи пептидогликана. Рис. . , i, . .. . , . . i ii, . .i , . . v. . i ii, . . ii i. . i а. , . Несмотря на различия в составе пептидных субъединиц, можно выделить и общие структурные особенности I все пептидные субъединицы состоят из коротких три или тетрапептидных цепочек, связанных с мурамоЕОй кислотой 2 чередование Ь и аминокислот 3 аминокислота, связанная с гликановой цепью всегда находится в конйигурации 4 карбоксильный конец пептидных субъединиц, как правило , представляет собой аланин. Пептидные субъединицы ДЕУХ соседних ГЛИКаНОЕЫХ цепей обычно ковалентно сЕязаны между собой прямо или через пептид, который называют перекрестносвязывающим мостиком. Такой мостик связывает вторую или третью аминокислоту одной пептидной субъединицы с карбоксильной группой четвертой аминокислоты аланин другой пептидной субъединицы. Количество перекрестно связывавщих мостиков у разных видов микроорганизмов варьирует. Предполагается, что перекрестносвязывающие мостики и пептидные субъединицы различных пептидогликанов являются видоспецифическими. Есе известные пептидоглпканы были разделены на 4 типа в зависимости от характера пептидной части полимера Савельев и ПетроЕ, , . Б пептидогликанах первого типа пептидные субъединицы двух соседних гликановых цепей прямо связаны между собой рис. Связь образуется между свободной аминогруппой диаминокислоты одной пептидной субъединицы и карбоксильной группой конечного аланининового остатка другой. К ним относятся пептидогликаны клеточной стенки . В. i, В.