Роль гистоноподобного белка HLp в процессе образования и реактивации покоящихся форм Mycobacterium smegmatis

• Автор: Анучин, Алексей Максимович
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2010
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 114 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
Список сокращений
Введение
Глава 1. Обзор литературы
Покоящееся состояние микроорганизмов. Определение
Клетки стационарной фазы. «Пролиферативный покой»
Морфологически дифференцированные покоящиеся формы бактерий
Покоящиеся формы микобактерий
Факторы, обеспечивающие поддержание покоящегося состояния
Гистоноподобные белки бактерий
Глава 2. Материалы и методы
Штаммы и условия культивирования
Клонирование
Получение покоящихся форм Mycobacterium smegmatis
Выделение и очистка рекомбинантных белков Rpf и Н1р
Мягкое выделение ДНК
Оживление НК клеток Mycobacterium smegmatis
Фракционирование морфологически дистинктных клеток Mycobacterium smegmatis
Включение радиоактивной метки
Проточная цитофотометрия
Световая и флуоресцентная микроскопия
Конфокальная микроскопия
Электронная микроскопия
Выделение липидов и их анализ
Изучение чувствительности клеток к действию стрессовых факторов
Измерение кругового дихроизма
Глава 3. Результаты и обсуждение
Получение покоящихся форм Mycobacterium smegmatis с использованием модифицированной среды 8К-1(Модель 1)
Электронная микроскопия овоидных клеток
Флуоресцентная микроскопия и проточная цитофотометрия
Культивируемость голодающих клеток Mycobacterium smegmatis
Оживление голодающих клеток Mycobacterium smegmatis
Чувствительность покоящихся клеток Mycobacterium smegmatis, полученных в модифицированной среде SR-1 к стрессовым воздействиям
Получение покоящихся форм М. smegmatis с использованием супернатанта двухсуточной культуры М. smegmatis, выращенной в среде NB (Модель 2)
Получение покоящихся морфологически дифференцированных форм Mycobacterium smegmatis
Устойчивость полученных форм к стрессовым воздействиям
Роль гистоноподобного белка Hip в процессе образования и реактивации покоящихся форм Mycobacterium smegmatis
Динамика перехода в покоящееся состояние различных штаммов М smegmatis
Способность покоящихся форм штамма Н1р-0 к оживлению
Устойчивость покоящихся форм штамма Н1р-0 к стрессовым воздействиям
Роль гистоноподобного белка Н1р в архитектуре нуклеоида
Взаимодействие гистоноподобного белка и ДНК in vitro
Изменения вторичной структуры ДНК при связывании Н1р
МЭЦ как возможный регулятор связывания Н1р с ДНК
Заключение
Выводы

Список публикаций Список литературы Приложения
Наши знания о бактериальных гистоноподобных белках в настоящее время ограничены, хотя ясно, что их детальное исследование перспективно для понимания молекулярных основ адаптации бактерий к стрессовым условиям. Особая роль гистоноподобных белков может состоять в их участии в формировании покоящихся форм бактерий. Учитывая уникальность гистоноподобных белков для прокариот, их можно рассматривать в качестве перспективных мишеней для создания лекарственных препаратов против возбудителей заболеваний человека и животных.
Обобщая материал, изложенный в обзоре, можно прийти к выводу о том, что общепризнанной является способность микобактерий переходить в нерепликативное и, возможно, покоящееся состояние. Однако, в отличие от случаев образования специализированных форм покоя (споры, цисты, акинеты) до сих пор образование морфологически дифференцированных покоящихся форм микобактерий не описано. Только в одной работе [Khomenko, 1984] было показано образование подобных форм in vivo, более того, инфицирование ими животных приводит к развитию заболевания. Однако эти работы не получили дальнейшего развития и не были воспроизведены в более современных работах. Таким образом, важным направлением остается нахождение условий, в которых бы воспроизводимо происходило образование морфологически дифференцированных покоящихся форм микобактерий в лабораторных условиях in vitro. Очевидно, что именно такие покоящиеся формы, как наиболее адекватно отражающие ситуацию in vivo, должны стать предметом дальнейшего изучения основ явления латентного туберкулеза.