Роль пероксиредоксина в регенерационных процессах в верхних дыхательных путях при термической травме

• Автор: Мубаракшина, Эльвира Кашифовна
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2009
• Место защиты: Пущино
• Количество страниц: 124 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМЫХ СОКРАЩЕНИЙ
ВВЕДЕНИЕ
I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1 Эпителий воздухоносных путей. Структура и функции
1.1 Носовая полость
1.2 Г ортань
1.3 Трахея
1.4 Бронхи
1.5 Состав и функции секрета воздухоносных путей
2 Термические ожоги
2.1 Ингаляционные ожоги
2.3 Обструкция дыхательных путей
2.4 Острый респираторный дистресс синдром и бронхиальная
циркуляция
2.5 Пневмония
3 Окислительный стресс при патологиях дыхательной системы
3.1 Источники активных форм кислорода
3.2 Антиоксидантная защита дыхательной системы
Супероксид дисмутазы (SODs) и каталаза (CAT)
Глутатион пероксидазы (GPxs)
Тиоредоксины (Trxs)
Пероксиредоксины
Каталитический цикл пероксиредоксинов
Пероксиредоксин
Антиоксидантная функция пероксиредоксина
ПОСТАНОВКА ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ
II МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
1 Материалы

2 Методы
2.1 Термический ожог верхних дыхательных путей крыс
2.2 Выделение Ргх 6 методом хроматографии Ионообменная хроматография на ДЭАЭ-сефарозе
2.3 Приготовление срезов, залитых в эпоксидную смолу
2.4 Приготовление парафиновых срезов
2.5 Получение криосрезов
2.6 Иммуногистохимический анализ
2.7 Получение соскоба респираторного эпителия трахеи крыс
2.8 Определение цитокинов в соскобе трахеи крыс
2.9 Определение пероксиредоксина 6 в соскобе эпителия трахеи
2.10 Мечение пероксиредоксина 6 флуоресцентным красителем
2.11 Инактивация пероксиредоксина 6 гидропероксидом водорода
2.12 Ионнообменнная хромотография
2.13 Электрофорез белков
2.14 Иммуноблоттинг
2.15 Определение антиоксидантной активности
пероксиредоксина
2.16 Определение концентрации белка
III РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
1 Разработка экспериментальной модели ожоговой травмы верхних дыхательных путей
1.1 Общее положение
1.2 Модель термического ожога верхних дыхательных
путей с помощью пара
Изменения морфологии эпителия в результате ожога трахеи 64 Лейкоцитарная реакция
Динамика развития воспалительного процесса в эпителии
Цитокиновый профиль

Динамика экспрессии Ргхб в трахее после термического ожога
2 Влияние экзогенного Ргхб на состояние эпителиальной ткани
после термического ожога верхних дыхательных путей
2.1 Локализация апплицированного Ргхб в пораженной трахее
2.2 Эффект аппликации Ргхб в пораженные
верхние дыхательные пути
2.3 Определение введенного Ргхб в пораженной трахее
2.4 Влияние экзогенного Ргхб на изменение структуры поврежденной эпителиальной ткани трахеи с течением времени
Анализ структуры эпителия обожженной трахеи
Анализ структуры гистолгических препаратов, где после
ожога вводили инактивированный Ргхб
Анализ структуры гистологических препаратов после
введения активного Ргхб
3 Влияние преднизолона на состояние эпителиальной ткани после термического ожога верхних дыхательных путей. Сравнительная характеристика преднизолона и Ргхб
3.1 Преднизолон и его функции
3.2 Влияние преднизолона на состояние эпителиальной ткани после термического ожога паром. Анализ гистологических препаратов
3.3 Сравнительный анализ
4 Регенерация респираторного эпителия. Образование респираторно-подобных структур внутри эпителия поврежденной трахеи
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТРАТУРЫ

Альбумин

В защите эпителия трахеи, бронхов и альвеол от окислительного повреждения основную роль играют ферментативные антиоксидаты. Наиболее важными представителями ферментов-антиоксидантов являются: супероксид дисмутазы (SODs), каталаза, глутатион пероксидазы (GPxs), глутатион S-трансферазы (GSTs), глутамил-цистеин синтазы (GCSs), глутаредоксины (Grxs), тиоредоксины (Trxs) и пероксиредоксины (Prxs) (рис. 4). Как было показано, у человека наиболее важные антиоксидантные ферменты экспрессируются в воздухоносных путях [Erzurum S.C. et al, 1993; Kinnula V.L. et al., 1994b; Yoo J.H. et al., 1994].
Рис.4. Схема продукции активных форм кислорода.
Супероксид дисмутазы (SODs) и каталаза (CAT). SOD, представленная в клетках млекопитающих двумя основными формами (изоферментами) - Си, Zn-содержащей SOD растворимой фракции клеток и Mn-содержащей SOD, локализованной в митохондриях, осуществляет восстановление Оо'2 до Н202 (Рис.З) [Yuokko L. et al., 2003], а гемопротеид каталаза разлагает образующуюся Н202 [Chelikani P. et al., 2004]. Методом in situ гибридизации на легких контрольных крыс было показано