Сравнительное исследование эффектов токсинов разной природы на стрессовый ответ лимфоидных клеток: роль некоторых каскадов внутриклеточной сигнализации

• Автор: Парфенюк, Светлана Борисовна
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2011
• Место защиты: Пущино
• Количество страниц: 143 с. : ил.

Содержание
Список сокращений
ВВЕДЕНИЕ
ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1. Сепсис и механизмы его развития
1.2. TLR4 сигнализация
1.3. Сигнальный каскад NF-kB
1.4. Сигнальный путь SAPK/JNK
1.5. Химические токсины
1.6. Белки теплового шока
1.7. Цитокины
1.8. Окислительный стресс при воспалениях и роль антиоксидантов в регуляции уровня провоспалителыгого ответа
1.8.1. Витамин Е (а-токоферол)
1.8.2. p-каротин
1.8.3. Коэнзим Q (убихинон)
1.9. Ингибиторы TLR4. Их применение для лечения и предупреждения сепсиса
1.9.1. Антитела против TLR4 и комплекса TLR4-MD
1.9.2. Эриторан или Е5
1.9.3. ТАК
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1. Животные и модель токсического стресса
2.2. Модель острого токсического стресса
2.3. Диета с антиоксидантами
2.4. Культура клеток и измерение их функциональной активности.
2.4.1. Выделение сыворотки
2.4.2. Культивирование клеток макрофагальной линии RAW 264.7 в присутствии ингибиторов
2.4.3. Культивирование изолированных клеток в присутствии химических веществ
2.4.4. Выделение лимфоцитов
2.4.5. Выделение перитонеальных фагоцитов
2.4.6. Измерение продукции фактора некроза опухолей, интерлейкинов и интерферона-у
2.4.7. Измерение оксида азота
2.4.8. Ds-Na-ПААГ электрофорез и иммуноблотинг
2.5. Статистическая обработка полученных данных
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
3.1. Влияние острого воспаления, вызванного бактериальным эндотоксином на функциональную активность клеток in vivo
3.1.1.Цитокины и оксид азота при остром воспалении
3.1.2. Цитокины в плазме крови при остром воспалении
3.1.3. Экспрессия белков теплового шока при остром воспалении
3.1.4. Влияние острого стресса на фосфорилирование сигнальных белков
3.2. Влияние химических токсинов на функциональную активность клеток
3.2.1 .Влияние химических токсинов на функциональную активность клеток in vivo
3.2.1.1. Цитокины in vivo
3.2.1.2. Оксид азота in vivo
3.2.1.3. Экспрессия белков теплового шока (HSP72 и HSP90-a) и активность каскадов NF-кВ и SAPK/JNK в экспериментах in vivo
3.2.2.Влияние химических токсинов на функциональную активность клеток in vitro
3.2.2.1. Цитокины in vitro
3.2.2.2. Оксид азота in vitro

3.2.2.3. Экспрессия белков теплового шока (HSP72 и HSP90-a) и
активность каскадов NF-кВ и SAPK/JNK в экспериментах in vitro.
3.3. Защитные свойства липорастворимых антиоксидантов при воздействии липополисахарида и химических токсинов в низкой концентрации
3.3.1. Фосфорилирование сигнальных белков
3.4. Роль ингибиторов сигнальных каскадов
3.4.1. Влияние ингибиторов TLR4 сигнальных путей на продукцию цитокинов клетками макрофагальной линии RAW 264.
3.4.2. Экспрессия белков теплового шока, сигнальных белков и рецепторного белка TLR4 в присутствии ингибиторов
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЦИТИРУЕМОЙ ЛИТЕРАТУРЫ

характерен рост модификаций белка, связанных с гомеостазом процессов свертывания (Soti et. al., 2002). Функции шаперонов нарушаются, увеличивается потребность в деградации белков, но активность главного протеолитического аппарата, протеасомы, также снижается с возрастом, что усиливает опасность гликизирования. Агрегация также сопровождается ингибированием функций протеасом и остановкой клеточного цикла. С возрастом нарушается и лизосомальная деградация белков (возможно, за счет подавления липофусцином). Накопление неправильно свернутых белков и ослабление защитных механизмов приводит к образованию белковых агрегатов, нарушающих клеточные функции и являющихся причиной возрастных болезней.
Для всех изученных видов организмов характерно наличие денатурированных и агрегированных белков в стареющих клетках. У человека многие возраст-зависимые заболевания (болезни Альцгеймера, Паркинсона, прионные болезни и др.) сопровождаются накоплением неправильно расщепленных и/или свернутых белков, что связано с нарушением функций HSP. Одним из недавних открытий, указывающих на связь белков теплового шока и старения, можно считать обнаружение роли деацетилазы SIRT1 (фактора долгожительства) как активатора HSF1. Этот факт дополняет полученные ранее данные об участии HSF1 в регуляции продолжительности жизни. Таким образом, HSF1 оказывается в центре регуляторной цепи, связывающей стресс, питание и долголетие. Добавление HSF1 к этой стресс-регулирующей системе включает гомеостаз белков в осуществляемую SIRT1 защиту клетки и позволяет объяснить возраст-зависимое снижение ответа на тепловой шок (по крайней мере, частично) ослаблением регуляции сиртуинами активности фактора теплового шока HSF1. С другой стороны, это позволяет предположить, что активаторы деацетилазы SIRT1 (например, ресвератрол) будут усиливать ответ клетки на тепловой шок, увеличивая продолжительность жизни (Westerheide et. al., 2009).