Исследование структурно-функциональной роли С-конца молекулы гамма-интерферона

• Автор: Цивковский, Руслан Юрьевич
• Шифр специальности: 03.00.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1999
• Место защиты: Кольцово
• Количество страниц: 147 с.

ОГЛАВЛЕНИЕ

Введение
Глава 1. Обзор литературы. Механизмы реализации биологических
свойств гамма-интерферона и роль в этом С-конца молекулы.
1.1. Введение
1.2. Связывание уИФН с клеточным рецептором и передача сигна
ла в клетку.
1.3. Иммуномодулирующие свойства уИФН
1.4. Антивирусная активность уИФН
1.5. Антипролиферативное действие уИФН
1.6. Роль уИФН в усилении фагоцитоза
1.7. Адъювантные свойства уИФН
1.8. Роль С-конца в реализации различных функций уИФН
1.9. Формулировка задач по уточнению структурно
функциональной организации С-конца уИФН.
Глава 2. Материалы и методы
2.1. Модификация олигонуклеотида 4-аминооксибутиламином
2.2. Методика определения субстратных свойств модифицирован
ных дезоксицитидин-5 ’-трифосфатов.
2.3. Получение С-концевого фрагмента гена а-фетопротеина
2.4. Выделение гибридного белка ИФН-АФП
2.5. Определение димерной структуры белков методом ковалент
ной сшивки.
2.6. Определение констант связывания гамма-интерферона и его
аналогов со специфическим клеточным рецептором.
2.7. Определение фагоцитоз-стимулирующей и антипролифера
тивной активности белков.

2.8. Иммунизация кроликов и определение титров сывороток к а- 52 фетопротеину.
Глава 3. Результаты и обсуждение
3.1. Изучение структурно-функциональной организации С-конца
у-интерферона.
3.1.1. Получение продуцента гибридного белка ИФН-АФП в E.coli
3.1.2. Очистка гибридного белка ИФН-АФП
3.1.3. Исследование физико-химических свойств С-концевых анало
гов уИФН.
3.1.4. Исследование биологических свойств аналогов уИФН
3.1.5. Изучение иммуностимулирующих свойств уИФН в составе
гибридного белка ИФН-АФП.
3.2. Разработка методов статистического мутагенеза с использова
нием 4-аминооксибутиламина и его производных.
3.2.1. Разработка способа введения мутаций в ограниченный район
ДНК с использованием олигонуклеотида, модифицированного АОБА.
3.2.2. Получение мутаций в протяженном районе целевого гена пу
тем создания одноцепочечного района необходимой длины и
его дальнейшей модификации АОБА.
3.2.3. Получение АОБА-производного dCTP (dC**TP) и изучение
его субстратных свойств в полимеразной системе in vitro.
3.2.4. Исследование мутагенных свойств dC**TP
Заключение
Выводы
Литература

БЛАГОДАРНОСТИ
Автор глубоко признателен за помощь в освоении ряда методик, проведении части экспериментов и постоянные рекомендации и консультации по различным теоретическим и практическим вопросам научным сотрудникам: к.х.н. Сиволобовой Г.Ф., к.б.н. Кочневой Г.В., Гражданцевой A.A., к.х.н. Серпинскому
О.И., к.б.н. Смирновой О.Ю., к.х.н. Решетникову С.С., Батуриной И.И. (ГНЦ ВБ «Вектор»), к.ф-.м-.н. Христофорову B.C. и к.б.н. Косареву И.С. (Институт инженерной иммунологии РАН), д.м.н. Черных Е.Р и к.м.н. Останину A.A. (Институт клинической иммунологии СО РАМН).
Автор также считает своим долгом поблагодарить своих научных руководителей Татькова С.И. и Ильичева A.A. за постоянную помощь и поддержку в течение всей работы и твердую уверенность в ее успешное завершение.
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
уИФН - гамма-интерферон человека АФП - альфа-фетопротеин человека дцРНК - двухцепочечная РНК
ИФН-АФП - гибридный белок гамма-интерферон- альфа-фетопротеин
АКО - аминокислотный остаток
АВА - антивирусная активность
АОБА - 4-аминооксибутиламин НгИСХСНгНг
ПАФ - полный адъювант Фрейнда
Расшифровка остальных сокращений приводится по ходу текста.

Рисунок 1.8.2. Предположительная схема взаимодействия С-конца уИФН с а-цепью рецептора.