Роль углеводов в функционировании и структурной организации ангиотензин-превращающего фермента

• Автор: Орт, Татьяна Анатольевна
• Шифр специальности: 02.00.15
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1998
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 164 с.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ:
АИФ - ангиотензин-превращающий фермент (дипептидилкарбоксипептидаза, К.Ф. 3.4.15.1).
д-АПФ - дегликозилированный ангиотензин-превращающий фермент. а-АПФ - десиалированный ангиотензин-превращающий фермент. д-1Ч-домен - дегликозилированная однодоменная форма ангиотензин-превращающего фермента.
PNGase F - дегликозидаза F (К.Ф. 3.5.1.52).
АОТ - натриевая соль ди-(2-этил)гексилового эфира сульфоянтарной кислоты (аэрозоль ОТ).
ЭДТА - этилендиаминтетрауксусная кислота.
ДСН - додецилсульфат натрия.
Tris - трисоксиметиламинометан.
HEPES - Ж2-гидрокси-этилпиперазин-М-2-этансуяьфоки слота.
PMSF - фенилметилсульфонилфторид.
FA-Phe-Gly-Gly - фурилакрилоил-Ь-фенилаланил-Ь-глицил-глицин. Hip-His-Leu - гиппурил-Ь-гистидил-Ь-лейцин.
Cbz-Phe-His-Leu - карбобензокси-Ь-фенилаланил-Е-гистидил-Ь-лейцин. FA-Phe-Phe-Arg - фурилакрилоил-Е-фенилаланил-Ь-фенилаланил-Ь-аргинин.
FA-Phe-Ala-Arg - фурилакрилоил-Е-фенилаланил-Е-аланил- L-аргинин. ПАА-углевод - гликонъюгаты на основе полиакриламидной матрицы. FITC-SiaLac - сиалшшактоза, меченная флуоресцеином.
W0 - [Н20]/[А0Т], степень гидратации обращенных мицелл.
ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ

ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР
Глава 1. УГЛЕВОДНАЯ СОСТАВЛЯЮЩАЯ
ГЛИКОПРОТЕИНОВ И ЕЕ ФУНКЦИИ
1.Е Биосинтез 1У-гликопротеинов
1.2. Регуляция процесса гликозилирования
ЕЗ. Функции олигосахаридов
1.3.1. Модуляция активности и физико-химических
свойств ферментов-гликопротеинов
1.3.2. Олигосахариды как детерминанты узнавания
в различных биологических процессах
Глава 2. ВЗАИМОДЕЙСТВИЯ С УЧАСТИЕМ УГЛЕВОДОВ,
ОБУСЛАВЛИВАЮЩИЕ БИОЛОГИЧЕСКОЕ УЗНАВАНИЕ
2.1. Белок-углеводные взаимодействия
2.1.1. Молекулярные основы лектин-углеводного узнавания
2.1.2. Протяженные центры пектинов и мультивалентное
связывание
2.1.3. Бифункциональные свойства пектинов
2.2. Углевод-углеводные взаимодействия
Глава 3. АНГИОТЕНЗИН-ПРЕВРАЩАЮЩИЙ ФЕРМЕНТ
3.1. Функции фермента в организме
3.2. Мембранная организация ангиотензин-превращающего
фермента
3.3. Модель активного центра ангиотензин-превращающего
фермента
3.4.
Состав и функции углеводной составляющей ангиотензин-превращающего фермента
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
Глава 4. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
4.1. Материалы
4.2. Методы исследования
4.2.1. Получение ангиотензин-превращающего фермента
4.2.2. Модификация ангиотензин-превращающего
фермента
4.2.3. Кинетические измерения
4.2.4. Спектральные измерения
4.2.5. Детекция олигомерного состояния АПФ
4.2.6. Изучение связывания углеводов с АПФ в водных
условиях
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
Глава 5. КРАТКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА АНГИОТЕНЗИН-
ПРЕВРАЩАЮЩЕГО ФЕРМЕНТА
5.1. Гомогенность и молекулярная масса
5.2. Углеводный состав
Глава 6. ВЛИЯНИЕ ГЛИКОЗИЛИРОВАНИЯ НА СВОЙСТВА
АНГИОТЕНЗИН-ПРЕВРАЩАЮЩЕГО ФЕРМЕНТА
6.1. Дегликозилирование ангиотензин-превращающего
фермента
6.2. Влияние дегликозилирования на стабильность
ангиотензин-превращающего фермента
6.3. Влияние дегликозилирования на каталитические свойства

цепей второго. Оптимальные условия возникают при контакте кластерных структур, например, гликолипидов и/или гликопротеинов двух соприкасающихся клеточных мембран [61-63]. Углевод-углеводное связывание может играть существенную роль во взаимодействии гликопротеинов с образованием различных комплексов и олигомерных структур. Так, показано [64], что при взаимодействии гликопротеина асиалофетина и маннозо-связывающего лектина многочисленные углевод-углеводные связи между олигосахаридами лектина и олигосахаридами гликопротеина существенно стабилизируют специфический лектин-гликопротеиновый (1:1) комплекс (Рис. 5). Дегликозилированный пектин терял способность образовывать такой комплекс [64].
Углевод-углеводные взаимодействия могут протекать как с участием ионов Са2+, так и как Са2+-независимые [65]. Механизм промотирования кальцием углевод-углеводного взаимодействия можно представить так: ион взаимодействует с гидроксильными (возможно, и ацетоамидными) группами одного партнера, затем второй углеводный партнер уже своими гидроксильными группами дополняет координационную сферу Са2+. Кальций-независимое взаимодействие основано на образовании водородных связей и ван-дер-вальсовых контактов между взаимодействующими углеводами. При благоприятном пространственном соответствии партнеров действует положительный кооперативный эффект, и, как результат, связывание заметно усиливается.
* * *
Резюмируя литературные данные глав 1 и 2, можно утверждать, что гликановые части гликопротеинов играют важную роль в разнообразных процессах, протекающих в организме. Олигосахариды гликопротеинов участвуют в создании различных контактов между молекулами с образованием сложных нековалентно связанных надмолекулярных структур, базирующихся на углевод-белковых и