Конструирование рекомбинантных аденовирусов и изучение их протективных свойств при иммунизации лабораторных животных против вируса гриппа A

• Автор: Седова, Елена Сергеевна
• Шифр специальности: 14.03.09, 03.01.06
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2010
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 148 с. : ил.

Структура вириона вируса гриппа Л. Современные вакцины против вируса гриппа птиц. Аттенуированные вакцины против вируса гриппа птиц. Инактивированные и субъеднничные вакцины против вируса гриппа птиц. Культуральные вакцины против вируса гриппа птиц. Рекомбинант ные субъеднничные вакцины против вируса гриппа птиц. Типы вирусных векторов, используемых для создания генетических вакцин. Материалы. Вирусы и бактериальные штаммы. Клеточные линии. Лабораторные животные. Лабораторное оборудование. Выделение РНК из вируссодержащей жидкости. Подготовка компетентных клеток . Подготовка компетентных клеток . Трансформация компетентных клеток . Трансформация компетентных клеток . Гомологичная рекомбинация в клетках . Препаративное разделение фрагментов ДНК и элюция ДНК из геля. Лигирование фрагментов ДНК. Накопление рекомбинантных аденовирусов. Выделение вирусной Д 1К. Титрование рекомбинантных аденовирусов. Определение функциональности флагеллина, экспрессируемого рекомбинантным аденовирусом совместно с М2е белком вируса гриппа птиц.


Оценка влияния предсушествующего иммунного ответа против аденовируса человека пятого серотипа на эффективность интраназальпой иммунизации рекомбинантными аденовирусами против вируса 1риппа птиц. Научная новизна. С помощью эффективной технологии получения рекомбинантных аденовирусов человека пятого серотипа, основанной на гомологичной рекомбинации в Е. И, был получен набор рекомбинантных аденовирусов, несущих поверхностные антигены вируса гриппа птиц АПА, несущий ген гемагглютинина вируса гриппа птиц Н5К2, и А5НА, несущий ген гемагглютинина вируса гриппа птиц Н5Ы1 и АсМ4Р1, несущий ген эктодомена белка М2 вируса гриппа птиц. Для создания рекомбинантного аденовируса человека, позволяющего при иммунизации против вируса гриппа птиц получить иммунный ответ широкого спектра действия, в качестве антигена был выбран эктодомен консервативного трансмембранного М2белка М2е вируса гриппа. Для достижения наиболее широкого спектра защиты от различных субтипов вируса гриппа птиц синтезирована искусственная последовательность белка М2е, консенсусная между штаммами, вируса гриппа птиц. Для повышения иммуногенности эктодомена М2белка вируса гриппа птиц использован ген лиганда для Толлподобного рецептора флагеллина Р1. Показана на культуре клеток активность рекомбинантного флагеллина, входящего в состав слитного белка, экспрессируемого аденовирусом АсМ4Р1 на линии клеток, несущих Толлподобиый рецептор 5. Определен уровень экспрессии рекомбинантных гемагглютининов НА и НА в пермиссивных клетках, трансдуцированных рекомбинантными аденовирусами АсНА и АсНА.