Разработка автоматизированного количественного агглютинационного теста (АКАТ) для иммунодетекции возбудителей и диагностики инфекций

• Автор: Коноплева, Мария Вениаминовна
• Шифр специальности: 14.00.36
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2007
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 0 с. : 179 ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
ОГЛАВЛЕНИЕ.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ б

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1 Развитие и совершенствование иммунологических методов на основе феномена агглютинации.

1.1 Теория преципитации и агглютинации в иммунохимии.

1.2 Разработка систем автоматизации и объективизации агглютинационных тестов

2 Применение агглютинационных тестов для серодиагностики

сифилиса, а также для иммунодетекции возбудителей бруцеллеза и туляремии.

2.1 Методы серодиагностики сифилиса

2.2 Методы выявления бруцелл
2.3 Методы выявления РгалскеНа ткиепэЬ
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.
3 Материалы. .
3.1 Штаммы бактерий и бактериальные антигены
3.2 Антисыворотки и атпитела
3.3 Формалинизированные эритроциты барана
3.4 Клинический материал
3.5 Диагностические тестсистемы. ..
3.6 Комплектующие аппаратнопрограммного комплекса Критерий 2
4 Методы исследования
4.1 Иммунизация мышей
4.2 Получение гибридом
4.3 Выделение моноклональных и поликлональных антител
4.4 ИФА для определения ЛПС бруцелл .
4.5 ИФА для определения ЛПС Р.ййагеюю
4.6 Приготовление тестовых и контрольных эритроцитов для РПГА
4.7 РПГА для определения ЛПС и микробных клеток бруцелл и Р.ийагашя
4.8 РПГА для выявления антитрспонемных антител.
4.9 Аппаратнопрограммный комплекс Критерий 2 и методика автоматизированного
количественного определения реакции агглютинации.
4. Клинические исследования АПК Критерий 2.
4. Статистические методы
РЕЗУЛЬТАТЫ
5 Общая характеристика программы анализа изображений РПГА
Критерий 2
6 Разработка РПГААКАТ для серодиагностики сифилиса .
7 Разработка РПГААКАТ и системы сравнения на основе ИФА для
иммунодетекции бруцелл
7. Получение и характеристика моноклональных антител, специфичных к ЛПС
бруцелл.
7.2 Разработка референского ИФА для иммунодетекции бруцелл
7.3 Разработка РПААКАТ для иммунодетекции бруцелл.
7.4 Определение чувствительности и специфичности РПГААКАТ для иммунодетекции бруцелл в сравнении с референсным тестом ИФА
8 Разработка РПГААКАТ и системы сравнения на основе ИФА для
иммунодетекции Гливгак.
8.1 Разработка референсного ИФА для иммунодетекции Р.Пагепяя
8.2 Разработка РПГААКАТ для иммунодетекции Р.тагепяя
ОБСУЖДЕНИЕ
ВЫВОДЫ.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Важной частью АПК является База Данных (БД), позволяющая удобно протоколировать процесс постановки РПГА, проводить поиск по пациентам и организациям, а также формировать несколько видов отчетов. Применение АПК «Критерий 2» и РПГА-АКАТ в клинической практике позволяет повысить выявляемость анти-трепонемных антител и снизить количество неопределенных результатов. Применение АПК «Критерий 2» в условиях широкомасштабного скрининга позволяет также не только значительно улучшить качество серодиагностики сифилиса, но и экономить реактивы и рабочее время, затрачиваемые на ретестирование. Зарегистрирован автоматизированный диагностический комплекс для учета результатов РПГА с использованием тест-системы «Люис РПГА тест» (№ ФС /-). Диагностический комплекс и методика РПГА-АКАТ используется в лабораторной практике в ведущих центрах дермато-венерологической службы: ГУ ЦНИКВИ, ГУЗ РКВД г. Чебоксары, 1 п-ка г. Москвы, 1-й КВД г. Москвы, КВД г. Мытищи, КВД г. Сочи, КВД г. Калуги, КВД г. Ханты-Мансийска, КВД г. Нижневартовска, КВД г. Майкоп, КВД г. Тверь, КВД г. Кызыл, КВД г. Тольятти. Агглютинационные тесты и твердофазный иммуноанализ, как методы, основанные на разных принципах, дополняют друг друга в верификации полученных с их помощью результатов серодиагностики и иммунодетекции. Существует множество теорий относительно механизма реакции преципитации, однако все они сходятся в том, что специфический преципитат образуется в результате соединения молекул антигена и антитела с последующим выпадением из раствора нерастворимого комплекса []. Различие между специфической преципитацией и агглютинацией зависит в основном от величины частиц антигена. Когда под действием антител происходит агрегация антигена, находящегося в виде отдельных молекул в растворе, то этот процесс называют преципитацией. Если же антиген находится в виде частиц, которые настолько велики, что видны под обычным световым микроскопом и выпадают при центрифугировании в осадок при - об/мин, то агрегацию этих суспендированных частиц под действием антител называют агглютинацией. В иммунохимии специфическую агглютинацию рассматривают как реакцию преципитации, происходящую на поверхности крупных частиц []. В начале процесса агглютинации одиночные частицы сначала становятся дуплетами, количество мономерных частиц существенно падает, а видимый диаметр аглютинатов быстро возрастает. После этого изменения в количествах и диаметрах замедляются []. Zinsser еще в г. Это предположение было доказано работами Jones и Pol, которые показали, что частицы коллодия, покрытые овальбумином (ОА), агглютинировались анти-ОА-сывороткой в разведениях, на порядки превышающих разведения, в которых ОА выявляли в преципитации []. Первичное связывание специфических антител с естественными антигенами эритроцитов (прямая гемагглютинация, ГА) вызывает образование скоплений эритроцитов, деформацию клеточных мембран и исчезновение дзета-потенциала []. Массированное образование поперечных связей между антителами и «нагруженными» антигеном эритроцитами выражается в видимом визуально слипании (агглютинации) эритроцитов. ГА могут вызывать как преципитирующие, так и непреципитирующие антитела. На этом основана высокая чувствительность разных вариантов ГА для обнаружения антигенов []. Методы агглютинации получили дальнейшее развитие, когда чувствительность реакции агглютинации для выявления антител была повышена за счет адсорбции полисахаридных антигенов на поверхности эритроцитов, либо «нагрузки» белковым антигеном обработанных танином эритроцитов. Данная модификация реакции агглютинации за счет искусственно присоединенных антигенов получила название реакции пассивной (непрямой) гемагглютинации (РПГА). Еще более высокая чувствительность была достигнута благодаря использованию вместо эритроцитов полистироловых латексных частиц, обладающих одинаковыми размерами. Благодаря разработке таких агглютинационных методик стало возможным использовать феномен агглютинации для исследования многих систем взаимодействия антиген-антитело [].