Оценка живой реассортантной гриппозной вакцины по индукции В - и Т- клеточной иммунологической памяти

• Автор: Кореньков, Даниил Анатольевич
• Шифр специальности: 14.00.36
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2009
• Место защиты: Санкт-Петербург
• Количество страниц: 119 с. : 16 ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
Оглавление

Список сокращений

ВВЕДЕНИЕ.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Теория иммунологической памяти.

1.1.1. Формирование и гомеостаз Тклеток иммунологической памяти.

1.1.2. Формирование и гомеостаз Вклеток иммунологической памяти.

1.2. Иммунологическая память при гриппозной инфекции.

1.2.1. Тклето чная иммунологи чес кая памят ь

1.2.2. Вклеточная иммунологическая память

1.3. Иммунологическая память при противогриппозной вакцинации
1.3.1. Тклеточная иммунологическая память
1.3.2. Вклеточная иммунологи чес кая памя ть.
1.4. Методы оценки иммунологической памяти.
1.4.1. Тклеточная иммунологическая память
1.4.2. Вклеточная иммунологическая память
2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1. Животные
2.2. Модель экспериментальной гриппозной инфекции и вакцинации
2.3. Вакцинируемые контингенты и вакцинные штаммы
2.4. Выделение и приготовление суспензии лимфоцитов НАЛТ мышей.
2.5. Выделение и приготовление суспензии лимфоцитов мононуклеаров периферической крови МПК людей
2.6. Сорбция антигена на полистироловых планшетах для проведения
иммуноферментного анализа и тестов авидности.
2.7. Iантитела в секретах верхних дыхательных путей.
2.8. Определение авидности секреторных Iантител в тесте с мочевиной.
2.9. Определение авидности секреторных Iантител в динамическом варианте ИФА
2 Аитигемагглютинирующие сывороточные антитела
2 Фенотипирование лимфоцитов МПК человека.
2 Вирусспецифическис клетки в периферической крови людей
2 Вирусспецифическис Тклетки в НАЛТ мышей
2 Статистический анализ данных
3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ
3.1. Оценка у людей Вклеточной иммунологической памяти по
критерию авидитета локальных Iантител
3.1.1. Адаптация методов оценки авидности локальных I на материале обследования не прививавшихся ЖГВ людей лет
3.1.2. Оценка авидности локальных Iантител у добровольцев лет иммунизированных вакцинными штаммами для ЖГВ
3.2. Оценка у людей Тклеточной иммунологической памяти по
выявлению в крови общих Тлимфоцитов с мембранным фенотипом .
3.2.1. Тлимфоциты иммунологической памяти, несущие мембранные маркеры , 4 и 8
3.2.2. Наивные Тлимфоциты, несущие мембранные маркеры
4 и 8.
3.3. Оценка у людей и животных иммунологической памяти по
тестированию вирусспецифических Т и Влимфоцитов.
3.3.1. Адаптация для оценки у людей вирусспецифической иммунологической памяти.
3.3.2. Специфические к вирусу гриппа 11 клетки иммунологической памяти людей, привитых ЖГВ.
3.3.3. Специфические к вирусу гриппа А 1I клетки иммунологической памяти при экспериментальной гриппозной инфекции
и вакцинации мышей.
4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
ВЫВОДЫ.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Метод дает возможность характеризовать эти иммуноглобулины одновременно по трем параметрам: (1) тигры антител; авидность антител с точки зрения (И) скорости и интенсивности соединения с антигеном, (Ш) прочности соединения с антигеном. Разработана модификация ТИАР'для количественного выявления у людей циркулирующих в крови Т-клсток, специфических к вирусу гриппа А. Эти методы могут быть использованы для оценки индукции В- и Т-клеточной иммунологической памяти у людей, привитых различными гриппозными вакцинами. Основные положения, выносимые на защиту. Однократная прививка ЖГВ взрослых лиц, уже контактировавших ранее с возбудителями гриппа, вызывает стимуляцию В- и Т-клеточной иммунологической памяти. Даже люди практически одного возраста ( — лет) весьма гетерогенны по показателям прсдвакцинального состояния иммунологической памяти к вакцинному штамму вируса гриппа А, входящему в состав ЖГВ. В- и Т-клеточной иммунологической памяти и их поствакцинальггыми изменениями. Т-клеток памяти, с другой. Апробация работы. Материалы диссертации доложены на X Всероссийском Научном Форуме с международным участием им. В.И. Иоффе «Дни иммунологии в Санкт-Петербурге» (Санкт-Петербург, мая - I июня г. Объединенном Иммунологическом Форуме (Санкт-Петербург, июня - 5 июля г. The Third European Influenza Conference (Vilamoura, Portugal, September - , ); Школе-Конференции для молодых ученых «Методы культивирования клеток» (Санкт-Петербург, 6 — октября г. Диссертационная работа апробирована на совместной научной конференции отделов иммунологии и вирусологи НИИЭМ СЗО РАМН «9» апреля г. Публикации. По теме диссертации опубликовано 9 печатных работ, в том числе 3 статьи и 6 тезисов. Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов, изложения результатов исследования и их обсуждения, выводов и списка цитируемых литературных источников. Работа изложена на 5 страницах текста, включающего таблиц и рисунков. Список цитируемой литературы содержит 5 источников, в том числе отечественных и 5 иностранных. В последние десятилетия в мировом научном сообществе пристальное внимание уделяется феномену иммунологической памяти. Общепризнано, что главной функцией иммунной системы является защита организма от проникновения различных патогенов. Формирование полноценного иммунитета и поддержание вторичного иммунного ответа происходит за счет четко координируемых взаимодействий между системами врожденного и адаптивного иммунитета. Именно на феномене стимуляции иммунологической памяти основан принцип вакцинации, когда введение вакцинного препарата за счет индукции клеток памяти предотвращает генерализацию инфекции при последующем контакте организма с циркулирующим, возбудителем. В этой связи изучение особенностей формирования иммунологической памяти весьма актуально для вакцинопрофилактики, особенно с точки зрения разработки оптимальных подходов к оценке ее эффективности [6, , , 4]. На фоне существующих в настоящее время довольно разрозненных данных о формировании и поддержании иммунологической памяти можно выделить две теории данного процесса. Первая рассматривает проявление иммунологической памяти как самоподдерживающийся процесс, основанный на внутренних программах клеточного развития [, 5]. В обеспечении протективного иммунитета в равной степени принимают участие как Т-, так и В-лимфоциты памяти, обеспечивая эффективный клеточный и гуморальный ответ и оказывая взаиморегулирующее действие. Однако механизмы их формирования и гомеостаза различны, поэтому далее, несмотря на единство всей иммунологической памяти в целом, мы рассмотрим по отдельности Т- и В-клеточную ее составляющие. Популяция Т-клеток памяти подразделяется на центральную и эффекгорную память [, 5]. Данное разделение базируется на экспрессии рецепторов хоминга, которые позволяют клеткам мигрировать во вторичные лимфоидные органы, и на некоторых функциональных характеристиках клеток. ФснотипН субпопуляций Г-клеток памяти. Наивные Т-клетки характеризуются экспрессией молекул С5ЯА, ССЯ7, наличием рецепторов костимуляции СЭ и СП, а также низкой экспрессией цитолитических молекул (гранзимы, перфорин).