Распределение аберрантно метилированных форм генов опухолевой супрессии и циркулирующих ДНК крови больных раком желудка

• Автор: Елистратова, Елена Владимировна
• Шифр специальности: 14.00.14
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2008
• Место защиты: Томск
• Количество страниц: 87 с. : 7 ил.

ВВЕДЕНИЕ. ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ. Белковые маркеры рака желудка. Молекулярногенетические маркеры рака желудка. Эпигенетические изменения. Циркулирующие ДНК. ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ. Клинические характеристики здоровых доноров и больных раком желудка. Взятие образцов крови. Приготовление элюатов с поверхности форменных элементов крови. Линии клеток и методы культивирования. Приготовление раствора ДНК с целыо построения калибровочной кривой. Определение концентрации циркулирующих ДНК в плазме и элюатах, выделенных с клеточной поверхности форменных элементов клеток крови. Выделение циркулирующих ДНК из плазмы и элюатов с клеточной поверхности. Получение геномной ДНК для положительного и отрицательного контроля в мегПЦР. Полимеразная цепная реакция, специфичная к метилированию. Визуализация продуктов мегПЦР. Иммуиохимическин анализ маркеров РЭА, СА . СА . Статистическая обработка данных. ГЛАВА 3. СОБСТВЕННЫЕ РЕЗУЛЬТАТЫ. Исследование концентраций циркулирующих ДНК. Анализ статуса метилирования промогорных областей генов i опухолевой супрессии р5, , I в циркулирующих ДНК плазмы и связанных с
генетических методов представляется в настоящее время особенно перспективным для ранней онкодпагностики.


Однако исследователями отмечается, что частота выявления онкомаркеров в цирДИК плазмы крови больных раком желудка значительна ниже по сравнению частотой их выявления в опухолевой ткани 8. Как было показано в недавних исследованиях, внеклеточные ДНК не только свободно циркулируют в плазме крови, но также могут быть связаны с поверхностью форменных элементов крови . Эти данные позволяют надеяться, что проблема более низкой частоты
дегскции гаперметилированных генов опухолевой супрессии в крови по сравнению с исследованием опухолевой ткани при раке желудка может быть успешна преодолена. Все сказанное определяет актуальность исследования распределения аберрантного метилирования генов опухолевой супрессии в циркулирующих ДНК крови больных раком желудка. Определить концентрацию цирДИК и изучить распределение между фракциями плазмы и связанных с клеточной поверхностью форменных элементов крови у больных раком желудка на разных стадиях заболевания. Проанализировать частоту выявления аберрантно метилированных форм генов опухолевой супрессии р, МОМТ, ЙМЬШ в цирДНК плазмы и фракции связанной с поверхностью клеток крови у больных раком желудка на разных стадиях заболевания. Провести сравнительное исследование чувствительности и специфичности анализов эпигенетических маркеров р , МОМТ, ЬМЬН1 в цнрДНК и стандартных онкоспецифических белков РЭА, СА . СА . Впервые показано, что по мере распространенности рака желудка происходит достоверное увеличение концентрации цирДНК плазмы, тогда как конценфация цирДНК, связанных с клеточной поверхностью, достоверно не изменяется.