Клиническая и молекулярно-генетическа характеристиа мутаций гена-рецептора липопротеидов низкой плотности у российских пациентов с семейной гиерхолестеринемией

• Автор: Мешков, Алексей Николаевич
• Шифр специальности: 14.00.06
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2006
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 0 с. : 108 ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
ВВЕДЕНИЕ
ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
ГЛАВА 2 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1 Пациенты
2.2 Материалы
2.3 Анализ липидов
2.4 Выделение ДНК из замороженной цельной крови методом фенолхлороформной экстракции с использованием протеиназы
2.5 Полимеразная цепная реакция
2.6 Метод анализа полиморфизма подвижности конформаций одноцепочечной ДНК
2.7 Секвенирование
2.8 Методы доказательства патогенности найденных мутаций в гене рЛПНП
2.9 Выявление мутации АроВ методом рестриктного анализа
2. Выявление мутации АроВ методом аллельспецифической ПЦР
2. Статистическая обработка данных
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
3 1 Клиническая характеристика пациентов
3.2 Молекулярногенетическая характеристика пациентов
3.3 Клиническая характеристика пробандов с найденными мутациями гена рЛПНП и их родственников
3.4 Разработка тестсистемы для быстрой детекции выявленных
мутаций гена рЛПНП
ГЛАВА 4 ОБСУЖДЕНИЕ
ВЫВОДЫ
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
ПРИЛОЖЕНИЕ А
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Наследственные формы атеросклероза имеют наиболее злокачественное течение и наименее благоприятный прогноз [,,]. Наиболее хорошо изученным наследственным заболеванием, приводящим к раннему развитию атеросклероза, является семейная гиперхолестеринемия (СГ). СГ является распространенным наследственным моногенным заболеванием, встречающимся в популяции с частотой 1 на 0 человек []. Среди пациентов с ИБС моложе лет, у 5% заболевание обусловлено гетерозиготной формой СГ []. Основные клинические симптомы заболевания: высокий уровень холестерина ЛПНП и раннее развитие ИБС Заболевание в большинстве случаев обусловлено мутациями в гене рецептора ЛПНП или аполипопротеина В-0 (АпоВ-0). ЛПНП из крови, что приводит к повышению уровня холестерина ЛПНП в крови и раннему развитию атеросклероза [,] Показано, что у лиц с СГ, ИБС возникает на - лет раньше, чем у других людей, и приводит к соответствующему сокращению продолжительности жизни [,]. Постановка диагноза СГ основывается на высоком уровне холестерина у пациента и высоких значений холестерина у родственников. Единственной альтернативой в настоящее время является ДНК-диагностика. Ранняя диагностика заболевания позволяет определить прогноз заболевания и назначить соответствующие меры первичной и вторичной профилактики. Если генетическая патология не выявляется вовремя и не проводится специальное лечение, то около % мужчин, имеющих СГ, переносят ИМ в возрасте до лет. В случае раннего обнаружения генетической патологии, развитие заболевания у лиц с СГ можно предотвратить с помощью адекватной терапии. К сожалению, гетерозиготная форма СГ очень часто выявляется только тогда, когда появляются клинические симптомы ИБС. Генодиагностика наследственных заболеваний основана на двух различных подходах. Первый - детекция известных мутаций Второй - методы сплошного скрининга, для проверки идентичности последовательности исследуемого гена нормальной последовательности Базой первого принципа является тот факт, что в популяциях обычно существует ограниченный набор мутаций, перекрывающий подавляющее большинство случаев многих известных наследственных заболеваний. Данный подход применим в обследованных популяциях. Он дешев, точен и уже применяется в настоящее время в западных клиниках [,]. Работы по определению генетической структуры СГ в развитых странах начались более лет назад и на сегодняшний момент накоплена уже значительная информация в настоящее время в мире известно более 0 мутаций в гене р-ЛПНП приводящих к развитию СГ [,,]. Кроме того, Российская популяция значительно больше и гетерогеннеє описанных западных популяций, что позволяет предполагать наличие в нашей популяции значительно большего числа уникальных для неё мутаций. В отличие от гена рецептора-ЛПНП, в гене АроВ-0 известно всего несколько мутаций (АроВ и АроВ), располагающихся в экзоне, который кодирует ЛІІНП рецептор-связывающий участок аполипопротеина В-0 [,,]. Доля этих мутаций в структуре заболевания, в разных странах, составляет 2-5%; данных по РФ в настоящий момент не достаточно [5. Обследовать методом SSCP все экзонов и промоторную области гена р-ЛПНП у пробандов с диагнозом СГ для определения у них мутаций в этом гене. Обследовать методом ББСР взрослых пробандов с нормальным уровнем холестерина для сравнения с результатами, полученными при обследовании пациентов с СГ и исключения функционально незначащих генетических перестроек. Научная новизна. При проведении данного исследования впервые в России у больных с семейной гиперхолестеринемией охарактеризовано мутаций гена рецептора-ЛПНП, из которых обнаружены впервые в мире, только одна мутация С9С, найденная в этом исследовании, была ранее описана в России. Всем мутациям дана клиническая и молекулярногенетическая характеристика. Патогенность выявленных мутаций хорошо доказана косвенными методами Продемонстрирована большая вариабельность мутаций гена рецептора ЛПНП и отсутствие мажорных мутаций в этом гене. Практическая значимость. ДНК гели более высокой процентное™ -%, обладающие большей разрешающей способностью.